顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低,并且存在多种非蛋白质成分,如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物,使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切,传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA/丙酮沉淀法, Hurkman 和 Tanaka 在 1986 年报道了一种先用苯酚提取然后用甲醇/乙酸铵沉淀的蛋白质提取方法,能有效去除核酸干扰,因为核酸可以与蛋白质相互作用,使双向电泳背景深,分辨率低。苯酚提取法首先是应用于纯化碳水化合物(去除蛋白质),然后是用于纯化核酸。对于分子生物学家来讲,酚抽提是一种从核酸溶液中去除蛋白质的首选方法。苯酚是最简单的芳香醇,芳香环上带有一个极性羟基,弱酸性,并且有腐蚀性和毒性。苯酚与水部分混溶:当达到饱和时,水相含有大约 7% 的苯酚,有机相含有大约 28% 的水。苯酚主要是通过氢键和蛋白......阅读全文

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顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)实验实验材料 植物组织试剂、试剂盒 苯酚提取缓冲液沉淀液等电聚焦缓冲液仪器、耗材 低温粉碎机实验步骤 3.1 蛋白质提取( 1 ) 新鲜植物组织在液氮中冷冻,然后在自动低温粉碎机中预先冷却的钢杯中将材料研磨成细碎的粉末(见注释 4) 。( 2 ) 在

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

实验材料植物组织试剂、试剂盒苯酚提取缓冲液沉淀液等电聚焦缓冲液仪器、耗材低温粉碎机实验步骤3.1 蛋白质提取( 1 ) 新鲜植物组织在液氮中冷冻,然后在自动低温粉碎机中预先冷却的钢杯中将材料研磨成细碎的粉末(见注释 4) 。( 2 ) 在一个 15 ml 的离心管(falcon  tube) 中加入

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低,并且存在多种非蛋白质成分,如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物,使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切,传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究实验

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)实验材料植物组织                                                          试剂、试剂盒苯酚                                                  

版纳植物园顽拗性种子生物学研究获综合进展

  龙脑香科濒危植物多毛坡垒(Hopea mollissima C. Y. Wu)的顽拗性种子萌发  西双版纳是我国少有的几个热带地区之一,同时又是我国植物种类最多、种植资源最丰富的地区,丰富的植物资源使其享有“植物王国”的美誉。然而,由于数十年来不合理的开发利用, 物种受

植物组织蛋白质提取方法

1、植物组织蛋白质提取方法(summer)1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清

骨组织的蛋白质组学研究成果

    邹汉法近年来广泛开展了蛋白质组学和多肽组学新技术新方法的研究,近两年来相关研究成果已在Mol.  Cel.  Proteomics(IF  9.876),Angew.  Chem.  Int.  Ed.(IF  9.596),Nucleic  Acids  Research(IF  7.

植物组织蛋白质用什么方法提取

植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。

植物组织蛋白质提取用什么方法

一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液,样品制备完成

蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类

蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类

蛋白质组学研究技术

可以说,蛋白质组学的发展既是技术所推动的也是受技术限制的。蛋白质组学研究成功与否,很大程度上取决于其技术方法水平的高低。蛋白质研究技术远比基因技术复杂和困难。不仅氨基酸残基种类远多于核苷酸残基(20/ 4), 而且蛋白质有着复杂的翻译后修饰,如磷酸化和糖基化等,给分离和分析蛋白质带来很多困难。此外,

离心机用于植物组织蛋白质的提取

 一、植物组织蛋白质提取方法(summer)    1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。    2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。    3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

定量蛋白质组学的研究内容

  1.蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。  2.翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化,糖基化,酶原激活等。翻译后修饰是蛋白质调节功能的重要方式,因此对蛋白质翻译后修饰的研究对

蛋白质组学研究的研究意义和背景

随着人类基因组计划的实施和推进,生命科学研究已进入了后基因组时代。在这个时代,生命科学的主要研究对象是功能基因组学,包括结构基因组研究和蛋白质组研究等。尽管已有多个物种的基因组被测序,但在这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。功能基因组中所采用的策略,如基因芯片、基因表达序列分析(Seria

蛋白质组学研究-可投哪些期刊?

    蛋白质作为功能的直接行使者,已经被科研工作这广泛应用于不同领域中,目前蛋白组学有很多优秀的科研成果,在各个领域及期刊上发表,其中也不乏CNS在内的顶级期刊。那我们的蛋白组学文章可以投哪些期刊呢?了解已发表文章的情况可以帮助我们很好的解决这个问题。这里,我们以“Proteomics”为关键词,

蛋白质组与蛋白质组学简介2

3 甲基化干扰实验用来检测蛋白质的结合位点。甲基化修饰的DNA探针可以干扰蛋白质的结合。结合位点上未被修饰的DNA片段才能与蛋白结合,然后将DNA从被修饰的碱基处切割,电泳分离,结合蛋白的DNA在结合位点上不能被修饰,不能切断,可确定结合位点的位置。 4 Dnase I 足纹分析 蛋白

蛋白质组与蛋白质组学简介1

一、蛋白质组概念:一个细胞、一个组织或一个机体全部基因所表达的全部蛋白质。 二、蛋白质组学研究范畴 1.蛋白质和蛋白质间 2.蛋白质和核酸之间 3.蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定 4.蛋白质结构分析 5.生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表

蛋白质组学研究的策略和范围

蛋白质组学一经出现,就有两种研究策略。一种可称为“竭泽法”,即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质,这种观点从大规模、系统性的角度来看待蛋白质组学,也更符合蛋白质组学的本质。但是,由于蛋白质表达随空间和时间不断变化,要分析生物体内所有的蛋白质是一个难以实现的目标。另一

蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制

 Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress.干旱胁迫对

植物蛋白质的提取方法

植物蛋白质的提取方法基本上有这几种:盐析法、有机溶剂法和等电点法。1、盐析法原理:盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐,使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出,而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。2、有机溶剂法原理:机溶剂引起蛋白质沉淀

安捷伦科技资助定量蛋白质组学研究

  安捷伦科技通过都柏林国立大学 Newman 奖学金计划   资助定量蛋白质组学研究  2010 年 5 月 12 日,加利福尼亚州圣克拉拉市和爱尔兰都柏林市 — 安捷伦科技公司(纽约证交所:A)和都柏林国立大学(University College Dublin, UCD)今日宣布 Ben

大连化物所蛋白质组学研究取得进展

  蛋白质甲基化是一种非常重要的翻译后修饰现象,其甲基供体为S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。由于甲基化可发生在氨基酸残基的N-,O-和S-中心,并且N-中心甲基化还存在不同状态,同时甲基化对分离行为影响非常细微,限制了对蛋白质甲基化组的解析。常规基于抗体的研究策略仅捕获了部分N-中心甲基化的信息。中国科

蛋白质组学研究系列仪器及软件

人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具,最好的实验

外泌体及其蛋白质组学研究

  外泌体是什么?  外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-200 nm。外泌体存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明,宿主

植物蛋白质组学和糖基化(二)

4. 注释( 1 ) 每个实验均使用新鲜的 3 mol/L 甲醇- HCl 和硅烷化试剂。( 2 ) 要仔细识别蛋白质印迹,因为 WGA 既能识别 N-糖苷的 GlcNAc,也能识别 O-GlcNAc。( 3 ) 用于在硝酸纤维素印迹膜上封闭结合位点的溶液应避免糖蛋白污染。所以我们建议在这一步骤中使

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                                                  牛胰核糖核酸酶 B                                                            

植物蛋白质组学和糖基化(一)

 1. 前言与其他真核细胞一样,植物细胞中,糖基化通常发生在分泌蛋白质上,虽然在细胞质蛋白和核蛋白上也发现一些糖基化反应。根据寡糖部分和蛋白质骨架之间的连接方式,可将糖基化分为两种类型:N -糖基化和 O-糖基化。植物中 N-糖基化研究最多。1.1 N-糖基化与其他真核细胞一样,在植物细胞中,N-糖

蛋白质组学研究的完整解决方案

人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具,最好的实验