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琼脂糖胶和PAGE胶制备方法

一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。因此,目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下。(1)琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事先处理就可以进行电泳。(2)琼脂糖凝胶结构均匀,含水量大(约占98%~99%),近似自由电泳,样品扩散较自由电流,对样品吸附极微,因此电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好。(3)琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。(4)电泳后区带易染色,样品极易洗脱,便于定量测定。制成干膜可长期保存。 &n......阅读全文

琼脂糖胶和PAGE胶制备方法

一、琼脂糖凝胶的特点    天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫

琼脂糖胶和PAGE胶制备方法

一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与

PAGE胶制备方法

实验概要SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中

PAGE胶制备方法

实验试剂1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯

PAGE胶制备方法实验

实验试剂1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯

SDS-PAGE胶制备

一. 实验原理: SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样

SDS-PAGE胶的干燥方法

凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形,但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量,因此,应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态,使其真空压力波动极少。(1)试剂与配制:固定液:冰醋酸:甲醇:水(10:20:70)(2)电泳后的凝胶用

SDS-PAGE胶的干燥

凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形,但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量,因此,应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态,使其真空压力波动极少。(1)试剂与配制:固定液:冰醋酸:甲醇:水(10:20:70)(2)电泳后的凝胶用

如何配制sds-page梯度胶

操作步骤( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液①

SDS-PAGE梯度胶怎么配置

操作步骤( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液①