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AFLP分子标记实验

其基本原理是:以PCR(聚合酶链式反应)为基础,结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增),再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。 一、 实验材料 采用青稞叶片提取总DNA。 二、 实验设备 1.美国贝克曼库尔特CEQ8000毛细管电泳系统, 2.美国贝克曼库尔特台式冷冻离心机, 3.美国MJ公司PCR仪, 4.安玛西亚电泳仪等。 三、 实验 试剂 1. 试剂 :请使用高质量产品,推荐日本东洋坊TOYOBO公司的相关产品。 DNA提取试剂盒; EcoRI酶,MseI酶,T4连接酶试剂盒; Taq酶,dNTP, PCR reaction buffer; AFLP引......阅读全文

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

常用的几种分子标记

RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段,一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段,利用凝胶电泳分开扩增的片段,从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术,并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术,因此简便易行。 SSR

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

植物RAPD分析技术

RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA),意为随机扩增多态性DNA,是利用PCR技术进行随机扩增,把扩增的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据DNA条带的多态性来反应模板DNA序列上的多态性。RAPD同AFLP、SSR等分子标记一样都基于PCR扩增,只

牧草DNA指纹图谱应用前景看好

  牧草品种的真假和种子质量的优劣直接关系到草业生产安全、农民增收和农(牧)区社会稳定。随着农牧业生产对优良牧草品种需求的提高,每年进入市场的育成牧草新品种数量也在快速增加,各种优良牧草品种越来越受到青睐,种植面积越来越大。而一些不法商家在利益驱动下,在种子生产经营过程中以假乱真、以次充好,坑农害农

水生所揭示出异育银鲫“中科3号”培育形成的机制

  异育银鲫“中科3号”是中国科学院水生生物研究所桂建芳研究员等在鉴定出可区分银鲫不同克隆系的分子标记,证实银鲫同时存在单性雌核生殖和有性生殖双重生殖方式的基础上,利用银鲫双重生殖方式,从D系银鲫(♀)与A系银鲫(♂)交配所产后代中筛选出少数优良个体,再经雌核生殖增殖扩群,经多代生长对比养殖试验评价

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用2

2玉米DNA指纹库的构建2. 1利用SSR分子标记构建玉米DNA指纹库目 前,国内外对玉米种质鉴定采用的遗传标记仍以形态标记为主,参考同工酶和种子贮藏蛋白标记。但形态标记的表现受环境影响较大,鉴定工作量大,周期长,受季 节限制。同工酶和种子贮藏蛋白标记多态性不够丰富,同工酶还存在组织和器官特异性,取

分子标记—AFLP原理和操作步骤

AFLP可用于:(1)构建遗传连锁图谱;(2)利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记;(3)AFLP辅助的轮回选择育种;(4)研究基因表达与调控;(5)分类和进化研究;(6)甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行

AFLP标记技术

实验概要AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来(附图)。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的

电泳仪电源简介

     电泳仪电源一般可分为两类:精简型和多用型。精简型均为双稳型,而多用型都是三稳型。无论有几种稳定功能,电泳仪电源在实际工作时只能稳其中一种参数,至于稳哪一种参数,要看电泳仪电源的设定以及电泳仪的等效负载电阻而定。     电泳仪电源

电泳仪电源的使用方法

    电泳仪电源一般可分为两类:精简型和多用型,精简型均为双稳型,多用型都是三稳型。无论有几种稳定功能,电泳仪电源在实际工作时只能稳其中一种参数。    市面上销售的电泳仪电源,按电压分为高压1500~5000V、中压500~1500V、低压500V以下三种

电泳仪电源的使用方法

    电泳仪电源一般可分为两类:精简型和多用型,精简型均为双稳型,多用型都是三稳型。无论有几种稳定功能,电泳仪电源在实际工作时只能稳其中一种参数。    市面上销售的电泳仪电源,按电压分为高压1500~5000V、中压500~1500V、低压500V以下三种

电泳仪选购参考

电泳是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,在电场中运动速度不同,根据上述特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。通常电泳仪不能空载使用,应仔

简单介绍电泳仪的使用方法和选购要求

 电泳仪:电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳分为自由界面电泳和区带电泳两大类:1、自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。2、区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持

简介电泳仪的使用方法和选购要求

 电泳仪:电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳分为自由界面电泳和区带电泳两大类:1、自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。2、区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持

电泳仪的选购

 电泳仪需要根据实验要求选择相应规格型号的电泳仪,才能确保经济、耐用、简单、合理。因为高、低压电泳仪内部结构特征不同,由于高压电泳仪常附加有多项功能,而且高压电泳仪绝不能空载运行(容易造成人身伤害、内部器件损坏),导致操作上难易程度的不同等。  为了方便用户选择合适的电

简介电泳仪的使用方法和选购要求

电泳仪:电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳分为自由界面电泳和区带电泳两大类:1、自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。2、区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支

电泳仪

电泳仪是一种开关电源,在电泳实验过程中为电泳设备提供实验所需要的电压、电泳、功率等相关电源的一种设备。根据不同的实验要求和不同的电泳仪,分别可用来做不同的实验,比如基础型电泳泳可以用来做常规水平电泳、中小垂直电泳、醋酸纤维膜等普通电泳实JJ验要求,推荐用于基础教学、临床诊断;通用型电泳仪可以各种印迹

AFLP技术

实验概要本实验介绍了AFLP(amplified fragment length polymorphism)技术。AFLP是一种建立在PCR基础上的限制性片断长度多态性分析,是一种重要而有效的分子标记技术。主要试剂AFLP试剂盒、测序胶、银染试剂主要设备PCR仪、银染设备实验步骤1. 总DNA提取(

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺

分子标记方法:AFLP原理和操作步骤

AFLP原理:AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘

农作物种子纯度鉴定方法综述4

4.2 SSR(Simple sequence repeat,简单序列重复标记)由Moore等于1991年创立。SSR即微卫星DNA,是一类由几个(多为1~5个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA串联重复序列,其长度一般较短,广泛分布于基因组的不同位置,如(cA)n、(AT)n、(GG

基于 AFLP 的转录表达谱分析

实验材料Total RNA试剂、试剂盒链霉亲和素包被的磁珠洗涤缓冲液EDTA第一链缓冲液第二链缓冲液DTT4 dNTP 的混合物SuperScript IIRNase HSTEXTris· ClRL缓冲液ATPPCR 缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液加样染料硅烷黏合硅烷溶液变性聚丙烯酰胺凝胶TBE 分