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高分辨率熔解曲线(HRM)分析预混Mix(PCR),能基因筛查吗?

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异。 作为一种高效稳健的"post-PCR"技术,它不受突变碱基位置与类型的限制,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨熔解即可完成对样品的分析。HRM技术因操作简便快捷、成本低廉、结果准确,并且实现了真正的闭管操作而受到普遍关注。HRM原理:在PCR反应前将新型DNA饱和荧光染料加入反应体系,然后将PCR产物直接导入高分辨熔解分析仪中,在一定的温度范围内将PCR扩增产物进行加热变性,仪器的光学检测系统采集、分析荧光信号并绘制温度熔解曲线,根据不同熔解曲线形状来区分(单个)碱基差异。最广泛的 HRM 分析应用领域是基因筛查。基因筛查是搜索 PCR 扩增片段中是否存在未知变异,它可在测序步骤之前进......阅读全文

农业领域中的应用-高分辨熔解曲线分析技术

高分辨熔解曲线分析技术(High Resolution Melting Curves Analysis)是近年来发展起来的一种检测基因突变和刷选SNP的新方法。这种方法也可以与标记和非标记探针结合对已知位点的突变和SNP进行检测以及用于SSR(STR)等短串联重复分子标记分析。该技术已经被大

多个序列突变的筛查-HRMA(一)

摘要:双链DNA分子转化为两个单链分子,DNA分子变性或熔解用于研究DNA结构和组成已经有多年。最近,新技术的进步提高了这种技术的潜力,尤其是用于DNA序列突变的检测。通过饱和DNA染料的发展和设备的改善,熔解的灵敏度和特异性有了很大的提高(改良的温度精确地结合每个时间单位温度的精确测量)。熔解分析

多个序列突变的筛查-HRMA(二)

突变检测    高分辨熔解曲线分析已用于DNA序列突变的检测,是第一个用于基因分型中的技术[Wittwer等,2003]。简便、廉价、容易使用、高灵敏性和高特异性是它的突出特点,使它成为一种用于基因分型和诊断应用实验室中有吸引力的新工具。在萨普,表S1给出了我们所能找到

一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法(一)

 为了促进斑马鱼的高通量的基因分型,我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析(HRMA)区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高,可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基

高分辨率熔点分析技术进行冻存组织样本甲基化的检测

1 前言      启动子高度甲基化是恶性肿瘤基因转录中的一种很常见的现象,被视为细胞恶性转化的标志之一。DNA甲基化分析是一种基因检测工具,用于早期癌症检测、风险评估与治疗疗效评估,具有非常诱人的前景。      &n

LightCycler应用:甲基化分析

主要应用:应用实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一,它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶-鸟嘧啶(CpG二核苷酸)的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团,形成5-甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度较高的区域在人体基因组中呈非随机分布于,

多个序列突变的筛查-HRMA(三)

前序列筛查    使用HRMA进行前序列筛查,特别是对于大基因可以节省很大的成本;Provaznikova 等[2008]报道对于MYH9基因可以避免85%的测序。在例中的DMD基因,第79个外显子需要分析(Al-Momani 等),假定每个外显子测序需要1

盘点:分子诊断常用技术50年的沿革与进步

  一、基于分子杂交的分子诊断技术  上世纪60年代至80年代是分子杂交技术发展最为迅猛的20年,由于当时尚无法对样本中靶基因进行人为扩增,人们只能通过已知基因序列的探针对靶序列进行捕获检测。其中液相和固相杂交基础理论、探针固定包被技术与cDNA探针人工合成的出现,为基于分子杂交的体外诊断方法进行了

高通量、低成本 SNP、突变和甲基化检测方法 ——HRM技术应用

  HRM介绍    HRM技术是 high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术,是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的 PCR技术,HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在 PCR结束后直接运行高分

高通量、低成本 SNP、突变和甲基化检测方法 ——HRM技术应用

HRM介绍     HRM技术是 high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术,是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的 PCR技术,HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探

赛默飞重推移动检测解决方案 定制化快速筛选

  2014年9月24日,赛默飞世尔科技亮相于上海新国际博览中心召开的2014慕尼黑上海分析生化展,隆重推出了赛默飞移动检测解决方案并召开新闻发布会,赛默飞中国

一文读懂分子诊断常用技术

  基于分子构象的分子诊断技术  (一)变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)与单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)  1970~1980年间,Fischer等

解读《肿瘤个体化治疗检测技术指南》:9大检测技术

  肿瘤的个体化治疗基因检测已在临床广泛应用,实现肿瘤个体化用药基因检测标准化和规范化,是一项意义重大的紧迫任务。  为进一步提高肿瘤个体化用药基因检测技术的规范化水平,7月31日,国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会,在广泛征求意见的基础上,制订了《肿瘤个体化治疗检测技术指南(试行)》。  

【招标】恩施疾控中心发布新冠应急采购公告,涉及PCR等

  分析测试百科网讯 近日,恩施市疾控中心设备需求公告,将采购实时荧光定量PCR仪、全自动微生物质谱快速鉴定系统、全自动微生物鉴定及药敏分析系统以及离子色谱,具体详情如下:需求公告  目前,新型冠状病毒感染的肺炎疫情防控已进入最吃劲的阶段,摸排筛查检测工作尤为重要,为进一步提高实验室检测能力,科学、

高分辨熔解曲线法HRM实现基因分型

HRM实现基因分型基因分型在动物、植物、微生物的物种、菌种筛查、筛选、缺陷、突变基因的检测,根据个体基因类型实现对诸如癌症治疗、监测等的精准用药,以及消费类基因检测如酒精代谢能力基因检测等等领域有很多应用。通常,基因分型SNP采用荧光探针终点法,检测一个位点需要两个荧光探针,如一个探针的荧光报告基团

一文读懂分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术

  四、定量PCR(quantitative PCR,qPCR)  相比于其他分子诊断检测技术,qPCR具有2项优势,即核酸扩增和检测在同一个封闭体系中通过荧光信号进行,杜绝了PCR后开盖处理所带来扩增产物的污染;同时通过动态监测荧光信号,可对低拷贝模板进行定量。正是由于上述技术优势,qPCR已经成

高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法—HRM 技术应用

HRM 介绍HRM 技术是high-resolution melting analysis 即高分辨熔解曲线分析技术,是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR 技术,HRM 不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在PCR 结束后直接运行高分辨熔解,即

一文读懂分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术

  分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料,用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常,从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常,以确定受检者有无基因水平的异常变化,对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗

微流控技术在临床检测中的应用

微流控技术是一种对微尺度流体(微升到皮升量级)进行精确控制和操纵的技术。近二三十年来,得益于纳米制造技术的成熟与生化技术对操纵微量液体的需求,微流控技术取得了飞速的发展。与传统的检测方法相比,基于微流控平台的检测技术具有节省样本与试剂用量,反应速度更快,高通量,易便携,自动化潜力高等优势。1998年

SNP检测——HRM技术应用

  HRM技术服务之SNP检测(snp检测的最佳方案)   单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs),指单个核苷酸碱基的改变,包括置换、颠换、缺失和插入,导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中,绝大多数核苷酸序列一

SNP检测——HRM技术应用

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs),指单个核苷酸碱基的改变,包括置换、颠换、缺失和插入,导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中,绝大多数核苷酸序列一致而只有一个碱基不同的现象,这就是SNP。SNP在人类

湖北新冠病毒检测试剂可先用后申报 这81家企业已可提供

  37、广州赛哲生物科技股份有限公司(400-888-4242)  赛哲成立于2010年,专注于病原微生物检测服务,旨在成为专业从事微生物预防、诊断和精准治疗的集团化企业。  2020年1月20日,赛哲生物对外公布成功批量生产新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒,援助各级医疗卫生机构进

实时荧光定量PCR技术在分子生物学和医学研究等领域的...

  定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied biosystems公司推出,它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该