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细胞总乙酰化水平的快速测定方法

步骤一:亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞,10000rpm 离心2 分钟,取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388,如右图所示), 用PBS 洗2 次,每次1ml。 3. 将细胞裂解上清液与洗好的填料(ICP0388)混匀,39oC 旋转摇床低速孵育60 分钟。 4. 1000rpm 离心1 分钟,去上清,用PBSt 重悬沉淀,1000rpm 离心1 分钟,去上清,重复3 次, 最后一次用PBS 洗,吸弃上清。 注:细胞裂解液里应该含有蛋白酶抑制剂,组蛋白乙酰化酶抑制剂等。 步骤二:释放及包被固定分离提纯的乙酰化蛋白 5. 用20ul 0.1M HCL 将步骤2 的抗赖氨酸抗体填料-乙酰化蛋白复合物于沸水中煮2 分钟,10000rpm 离心1 分钟......阅读全文

细胞总乙酰化水平的快速测定方法

   细胞总乙酰化水平的快速测定方法    -------免疫亲和色谱-ELISA 方法   步骤一:亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白   1. 用细胞裂解液裂解细胞,10000rpm 离心2 分钟,取上清备用。   2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated

9篇Nature文章同时发表 贺福初课题组发现肝癌治疗新靶点

  在2019年2月27日,同时有9篇Nature文章是有中国学者/华人发表的,具体的成果如下面所介绍:  北京生命组学研究所贺福初,复旦大学附属中山医院樊嘉,国家蛋白质科学中心钱小红共同通讯发表题为“Proteomics identifies new therapeutic targets of

基于尿液的疾病检测研究进展一览

  每次小便时,很多人只是将尿液冲走了事,并没有意识到尿液能够反映一个人的健康状态。尿液是一个令人难以置信的复杂的生物流体。  医生、营养学家和环境科学家不仅对尿液的物理性状,如尿量、颜色、透明度、气味、pH和比重等感兴趣,也对尿液的化学成分特别感兴趣,因为它们揭示了有关一个人的健康与否、他们所吃的

流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度

流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度庄明明,温奕欣,刘少列,洪晓鹏  西安交通大学学报2005年10月第26卷第5期摘要:目的建立流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的方法。方法 用Fluo3AM作为钙指示剂,在有或无细胞外钙\[Ca2+\]o存在的

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流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度庄明明,温奕欣,刘少列,洪晓鹏  西安交通大学学报2005年10月第26卷第5期摘要:目的建立流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的方法。方法 用Fluo3AM作为钙指示剂,在有或无细胞外钙\[Ca2+\]o存在的

【盘点】衰老与疾病的关联性研究进展

  人为什么会变老?对于人类来说,如何才能长生不老真的是一个令人着迷的问题。但是至今为止都没有一个让人满意的答案。衰老一直是生命过程中的核心环节,也是影响整个人类社会健康发展的重要问题。目前世界各国均面临着严重的人口老龄化,数据显示到2050年约三分之一的中国人口年龄将超过60岁。因此,深入了解衰老

默克Amnis量化成像流式细胞仪在纳米药物研究中的应用

  ImageStream技术建立在传统的流式细胞术基础之上,结合了荧光显微成像技术,它具有多个检测通道,可以对通过流动室中的每个细胞进行成像,实现了对细胞图像进行多参数量化分析,获得全新的细胞形态统计学数据。ImageStream系统配有功能强大的数据分析软件IDEAS,可以对每个细胞分析超过50

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  ImageStream技术建立在传统的流式细胞术基础之上,结合了荧光显微成像技术,它具有多个检测通道,可以对通过流动室中的每个细胞进行成像,实现了对细胞图像进行多参数量化分析,获得全新的细胞形态统计学数据。ImageStream系统配有功能强大的数据分析软件IDEAS,可以对每个细胞分析超过50

钙离子荧光探针类型大盘点

钙离子在许多生理过程中起着复杂的作用。例如,细胞内钙离子在促进神经元从神经元中释放神经递质的信号转导途径中必不可少,并参与所有肌肉细胞收缩所需的机制。细胞离子浓度受被动和主动离子通道和泵的调节。离子通道和泵的故障可能导致离子浓度调节不当,从而产生不利于正常细胞功能的不利条件。钙离子浓度研究领域中常使

缺血修饰性白蛋白在冠心病心肌缺血诊断中价值循证评价

急性冠脉综各征(ACS)是由于急性心肌缺血导致的胸部不适和其它症状的一大类病症,是临床常见的心脏血管急症,也是造成急性死亡的重要原因。心肌缺血是ACS 最常见的发病机制,临床工作中,有相当部分症状隐匿而未收入院治疗的病人实际是心肌缺血患者,这些漏诊病人的死亡性比住院患者高1倍。因此,临床工

CFDA发布90项医疗器械行业标准

  《血液透析及相关治疗用水》等90项医疗器械行业标准已经审定通过,现予以公布。其中,强制性医疗器械行业标准自2017年1月1日起实施,推荐性医疗器械行业标准自2016年1月1日起实施。  特此公告。    食品药品监管总局  一、强制性行业标准(共14项)  (一)YY 0572-201

工业微生物产生菌的分离筛选(3)

第三节   微生物的分离经富集培养以后的样品,目的微生物得到增殖,占了优势,其他种类的微生物在数量上相对减少,但并未死亡。富集后的培养液中仍然有多种微生物混杂在一起,即使占了优势的一类微生物中,也并非纯种。例如同样一群以油脂为碳源的脂肪酶产生菌,有的是细菌,有的是霉菌,有的是芽孢

微生物学检验基本技术(1)

随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感

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缺血修饰性白蛋白在冠心病诊断中应用价值循证评价

急性冠脉综各征(ACS)是由于急性心肌缺血导致的胸部不适和其它症状的一大类病症,是临床常见的心脏血管急症,也是造成急性死亡的重要原因。心肌缺血是ACS 最常见的发病机制,临床工作中,有相当部分症状隐匿而未收入院治疗的病人实际是心肌缺血患者,这些漏诊病人的死亡性比住院患者高1倍。因此,临床工作者一直致

产前诊断分析(二)

   产前诊断中的实验室检查  1.细胞遗传学的产前诊断  (1)羊水细胞染色体检查:羊水细胞主要来自胎儿的皮肤、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜脱落细胞。将羊水中的细胞经过常规培养后制备显带染色体以进行核型分析或脆性X染色体分析,而作出诊断。  (2)孕早期绒毛细胞染色体检查:

质谱沙龙第三十六期活动报道

  2012年7月21日下午,第三十六期质谱沙龙活动在北京市朝阳医院职业病与中毒医学中心如期举行。来自北京朝阳医院、北京大学人民医院、AB SCIEX公司、中国科学研究院、北京安定医院等二十余名专家、学者、技术工程师参加了本次沙龙活动。

如何定量检测cAMP和cGMP?

背景介绍  1958年Sutherland发现了cAMP(环磷酸腺苷),并因此获得了1971年诺贝尔生理与医学奖[1]. 1963年Ashman发现了cGMP(环磷酸鸟苷)[2]。50年过去了,人们已明白cAMP、cGMP是在很多生理过程中发挥重要调节作用的第二信使分子。鸟苷酸环

临床蛋白电泳及进展/基本知识/概述

分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清

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分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清蛋

糖尿病及其并发症的实验室检测及方法学评价

(一)体液葡萄糖的检测     酶法为推荐使用的测定方法(如:己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法)。         1. 标本收集和贮存        &nbs

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   (一)体液葡萄糖的检测    酶法为推荐使用的测定方法(如:己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法)。      1. 标本收集和贮存      

糖尿病及其并发症的实验室检测及方法学评价

(一)体液葡萄糖的检测    酶法为推荐使用的测定方法(如:己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法)。    1. 标本收集和贮存       大多数临床实验室采用血浆或血清测葡萄糖浓度,而大

共聚焦激光扫描显微镜的应用及荧光探针

一、LSCM常用的检测内容及其荧光探针 LSCM检测内容和应用范围非常广泛,以下仅简单介绍LSCM常用的检测内容及其荧光探针。 1.细胞内游离钙 共聚焦激光扫描显微镜常用的有Fluo-3、Rhod-1、Indo-1、Fura-2等,前两者为单波长激光探针,利用其单波长激发特点可直接测量细胞内Ca

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验             实验步骤

淀粉蛋白脑室内注射建立阿尔茨海默病大鼠模型(一)

【摘要】 目的 观察β淀粉样蛋白(Aβ) 脑室内注射建立阿尔茨海默病(AD) 大鼠模型及其对大鼠行为、胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性、细胞凋亡、神经生长因子(NGF) 水平等影响。方法 将Aβ1242 注射入大鼠侧脑室,于第1 周、2 周、4 周观察Morris 水迷宫逃避潜伏期、测定脑内ChAT

体液中的电解质平衡

(一)体液电解质分布及平衡 血浆中主要电解质有Na+、Cl-、K+.细胞间液是血浆的超滤液,其电解质成分和浓度与血浆极为相似,不同之处是血浆含有较多的蛋白质,而细胞间液不含或仅含少量的蛋白质,由于蛋白质是大分子量物质,不易通过细胞膜,故血浆蛋白含量高于细胞间液。 由于测定细胞内电解质含量很困难,所

环渤海色质谱学者精彩报告纷呈 贯彻“绿色化学”理念

  分析测试百科网讯 2016年8月11日,由辽宁省分析测试协会,辽宁省分析科学研究院主办的“第四届环渤海色质谱学术报告会暨辽宁省第十届学术年会分会”在丹东召开(相关报道:第四届环渤海色谱质谱学术会在丹东开幕 首次发布徽标)。大会上,众位环渤海的

原位杂交组织化学实验技术3

(四)杂交后处理(post hybridisation treatment)  杂交后处理包括系列不同浓度,不同温度的盐溶液的漂洗。在原位杂交组织化学的实验程序中,这也是一个重要的环节 。特别因为大多数的原位杂交实验是在低严格度条件下进行的,非特异性的探针片段粘附在组织切片上,从而增强了背景染色。R

梳理维生素E功能研究进展

  维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。它是机体许多器官、神经以及肌肉维持正常功能的必要营养物质,而且其也是一种抗凝剂,可以减少凝血。人体不能生成维生素E,只能从油脂、肉类以及其它食物中摄入,但是人们常常摄入维生素E的水平不足,尤其是在低脂饮