不用做免疫共沉淀也能检测间接相互作用？
生物被膜是由细菌胞外大分子包裹形成的有组织的细菌群体，其通常由细胞外聚合物组成，包括蛋白质、DNA和多糖，生物被膜能够帮助细菌抵御抗生素和宿主的免疫防御机制。值得注意的是，生物被膜会附着于导尿管、心脏植入物、消毒不充分的外科手术工具等医疗器械上，从而引起医院获得性感染。绿脓杆菌广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上常见的条件致病菌之一。绿脓杆菌能产生多种与毒力有关的物质，对化学药物的抵抗力比一般革兰氏阴性菌强大，并能在多种环境下形成强健的生物被膜。且细菌生物被膜是细菌为适应自然环境有利于生存的一种生命现象， 因此了解生物被膜产生和维持的遗传调控具有重要意义。研究其形成机理有望找到有效的抗菌药及提高机体免疫防御能力。Tung T. Hoang教授等人使用Nicoya的局域表面等离子共振技术探究了绿脓杆菌生物被膜形成与维持相关的复杂基因调控网络，由OpenSPR获得的结合动力学数据定量验证了转录调控因子PA1226......阅读全文
免疫共沉淀
实验概要本实验以植物叶片为试材介绍了免疫共沉淀的基本方法。主要试剂50uM雌激素，液氮，提取缓冲液TBS(50mM Tris-Cl，0.15M NaCl，pH 7.4，1mM PMSF，5mM Benzamidine)，glycine-HCl，TBS，洗脱缓冲液(TBS，0.5mg/mL 3
免疫共沉淀概述
实验概要本实验以植物叶片为试材介绍了免疫共沉淀的基本方法。主要试剂50uM雌激素，液氮，提取缓冲液TBS(50mM Tris-Cl，0.15M NaCl，pH 7.4，1mM PMSF，5mM Benzamidine)，glycine-HCl，TBS，洗脱缓冲液(TBS，0.5mg/mL 3
免疫共沉淀 简介
蛋白质间相互作用研究方法：免疫共沉淀1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入30μg的适当抗体，4℃摇动免疫沉
免疫共沉淀技术
免疫沉淀可用于定位甲基化或转录因子结合的位置等DNA变化，但可能需要与假抗体进行斗争。尽管ChIP-seq、DIP-seq和相关技术可以提供全基因组测定的相关信息，但它们并非总是有效。染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）或DNA免疫沉淀（DNA
免疫共沉淀技术路线
准备工作： 预冷PBS，RIPA Buffer，细胞刮子（用保鲜膜包好后，埋冰下），离心机 1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次吸干PBS； 2. 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶，0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2
免疫共沉淀试剂准备
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。试剂准备 预
什么是免疫共沉淀？
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在agaros
免疫共沉淀详细步骤
实验概要免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。本实验详细介绍了免疫共沉淀的详细步骤及注意事项。实验原理当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋
免疫共沉淀的技术缺点
（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。（4）灵敏度没有亲和色谱高。
免疫共沉淀的实验过程
（1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C， 最大转速离心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；（3）取10μl