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核酸定量内标与外标

众所周知,在实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)中模板的浓度对数值与结果Ct值呈线性关系,Ct值越小,浓度越高。根据所选取定量数学模型的差别,主要有外标定量法(外标法)和内标定量法(内标法)两种定量方法。这些数学模型就像特殊标记的尺子,把得到的Ct值测量为浓度值。外标法:即绝对定量,是使用一系列稀释的已知浓度标准品与临床标本同时进行测定,求出标准品的Ct值与起始模板浓度之间的线性比例关系。通过待测标本的Ct值就可以在线性关系中求出其原始的模板浓度。内标法:是指将标准内标与待测样本在同一管内扩增,然后通过内标的量来推导待测模板的量,是一种相对定量的数学模型。该模型是假定了临床样本和内标有一致的扩增效率。[1]内标法需要检测标准品吗?需要。要实现对样本的定量检测,必然需要使用到已知浓度的标准品,就像天平称量离不开砝码一样。内标法就像是用了一个苹果充当砝码,但这个苹果最初肯定得使用砝码称量一遍。与......阅读全文

荧光定量PCR检查的影响

  1.实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:  1)Ct值的重现性PCR循

实时荧光定量PCR无需内标

1.实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。1)Ct值的重现性:PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),

定 量 PCR 技 术 简 介

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在是否

定量PCR技术基本原理和方法以及PCR产物的检测与定量-2

1、非竞争内标定量PCR从细胞类标本中提取靶基因(核酸)时,同时会提取大量与靶基因无关的DNA或RNA;可以把这些靶基因无关DNA或 RNA作为内标与靶基因同步扩增,即在同样的反应条件下,在一个反应试管内同步扩增来自同一标本的一段靶基因序列和另一段无关的内标序列,不享受同一引物和引物结合位点,内

定量PCR技术基本原理和方法以及PCR产物的检测与定量-1

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在

核酸检测技术及其在国内外血液筛检中的应用(一)

  输血相关传染病的预防和控制已经成为全社会关注的焦点,新技术的引进是进一步提高血液安全性的重要一环。本文就病原体核酸检测技术(nucleic acid testing, NAT)及其在国内外血液筛检中的应用情况和结果作一介绍,并对该方法在我国推广和应用的必要性和可行性作初步探讨。1. N

临床基因扩增检验实验室工作规范(三)

(七)污染 在实际工作中,常见有以下几种污染类型:扩增片段的污染(产物污染);天然基因组DNA的污染、试剂污染(贮存液或工作液)以及标本间交叉污染(如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本)。临床基因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。由于一旦发生污染后,再围绕实验室来寻找污染源不仅

临床基因扩增检验实验室工作规范(三)

(七)污染 在实际工作中,常见有以下几种污染类型:扩增片段的污染(产物污染);天然基因组DNA的污染、试剂污染(贮存液或工作液)以及标本间交叉污染(如气溶胶从一个阳性标本扩散到原本阴性的标本)。临床基因扩增检验实验室中污染的最主要来源是扩增产物的污染。由于一旦发生污染后,再围绕实验室来寻找污染源不仅

质谱沙龙第十九期活动报道

  2009年5月23日,质谱沙龙第十九期活动在清华大学生物医学测试中心举行。此次到会者除了来自二炮总医院、西苑医院、清华大学医学院、发酵研究院、中科院微生物研究所、空军总医院、天津博纳艾杰尔科技、AB公司等老朋友外,还有来自戴安公司、东西电子的新朋友。报告后的讨论一直洋溢着热烈的气氛。   

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大,则指

实时荧光定量 PCR

Thomas D. SchmittgenDepartment of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy,Washington State University, Pullman, WA 99164.   &

乙型肝炎的实验室诊断及质量控制

2005年12月我国第一部《慢性乙型肝炎防治指南》颁布,2006年1月卫生部颁布了《2006-2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划》。其目的在于科学、规范和有效开展我国乙型肝炎防治工作。卫生部计划在未来3~4年内逐步建立全国乙型肝炎实验室检测网络,制定《全国乙型肝炎实验室检测工作技术规范》,加强实验

2020版药典大纲出来了,一起来目睹

  一、前言  《中国药典》2020 年版的编制,正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间,是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期,也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动,编制好新 版《中国药典》,对于保障公众用药安全有效,推进医药

2020版药典大纲出来了,一起来目睹

   一、前言   《中国药典》2020 年版的编制,正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间,是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期,也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动,编制好新 版《中国药典》,对于保障公众用药安全有效,推进

行业大咖齐聚蓉城,共话样品制备新技术新方法

  分析测试百科网讯 2021年6月17日,由四川省分析测试学会和分析测试百科网主办的首届样品制备及前处理前沿技术研讨会在成都世纪城会展中心召开。研讨会的宗旨是加强国内外分析测试领域专家在样品前处理和自动化技术方面的学术交流,拓展和普及样品前处理和自动化技术最新的成果。大会邀请国内一线专家,共同探讨

长知识哦,实验员逃不过的104个问题!

  实验室人员经常为实验检测方法分类而头疼,掌握了这104条你就可以熟练成为一名实验经理人啦!  1 色谱分析法 :  色谱法是一种分离分析方法。它利用样品中各组分与流动相和固定相的作用力不同(吸附、分配、交换等性能上的差异),先将它们分离,后按一定顺序检测各组分及其含量的方法。

实验猿的苦恼你别猜!记住这些,你是真正的分析实验员

  分离分析法导论  1 色谱分析法 :  色谱法是一种分离分析方法。它利用样品中各组分与流动相和固定相的作用力不同(吸附、分配、交换等性能上的差异),先将它们分离,后按一定顺序检测各组分及其含量的方法。  2 色谱法的分离原理 :  当混合物随流动相流经色谱柱时,就会与柱中固定相发生作用(溶解、吸

基因芯片技术与检验医学

  什么是基因芯片?基因芯片就是利用点样技术、现代探针固相原位合成技术、照相平板印刷技术等微电子技术在有限的空间内,有序的集成一系列的可寻址识别的基因片段,以用于高通量、高速度、低成本的一种分子生物学工具。按照芯片的制作原理,基因芯片可以分为很多类,但目前真正成熟的,得以广泛应用的仍只有使用点样或原

2449.8万!这所高校发布采购建设分析测试中心平台

  分析测试百科网讯 近日,海南省教学仪器设备招标中心受招标人海南大学委托,采购场发射透射电子显微镜、基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱仪、纳米喷雾干燥仪、石英晶体微天平、多功能样品前处理平台、热重-红外图像-气质联用原位反应系统、显微傅里叶变换红外光谱仪+光声光谱检测器、差示扫描量热

400余华人相聚圣安东尼奥 2016 CASMS华人聚会

  2016年6月5-9日,第64届美国质谱年会 (ASMS 2016) 在美国德克萨斯州圣安东尼奥Henry B. González会议中心召开。正如往年一样,6月7日即每次ASMS的星期二,北美华人质谱学会(Chinese American Society

免疫组化发展及原理

  1941年Coons首先用荧光素标记抗体—检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。  60年代 Akanke建立酶标抗体技术—铁蛋白标记Ab技术  70年代 Stemberger改良上述技术,建立辣根过氧化物酶—抗体过氧化物酶(PAP)技术,使免疫细胞化学得到广泛应用。  80年代 Hsu等建立了抗生

认监委组织58项检验检疫行业标准方法进行标准验证

  各直属检验检疫局,中国检验检疫科学研究院,各检验检疫标准化专业技术委员会:  为提高检验检疫方法标准的科学性、严谨性和适用性,进一步提升检验检疫行业标准质量,2017年,国家认监委拟继续对检验检疫行业标准中方法标准进行验证工作。现将有关事项通知如下:  一、验证项目  具体项目及承担单位清单详见