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图1。上图描述的是TaqMan miRNA的检测原理，基于TaqMan实时定量miRNA的包括两个步骤，茎环RT和实时PCR。茎环RT引物结合在miRNA分子的3'端和用反转录酶逆转录。然后，RT产品使用传统的TaqMan PCR定量，其中包括特定miRNA的正向引物，反向引物和染料标记的TaqMan探针。尾正向引物5'的作用是根据miRNA分子的序列组成增加其熔融温度（Tm）。 图2。TaqMan-4 miRNA的检测的动态范围和灵敏度。 （A）4超过7个数量级的 lin-4 miRNA扩增曲线。合成的RNA输入范围从1.3×10－3 fM（相当于每次反应7个拷贝数） 〜1.3×104 FM（相当于每次反应7×107拷贝数）；（B）lin-4 miRNA的标准曲线。 miRNA定量的动态范围和灵敏度的计划使用一种人工合成的CEL-LIN-4靶进行首次评估。合成的RN......阅读全文
Stem-loop实时定量RT PCR传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体，而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术，包括设计具有茎环（stem loop）结构的反
摘要：已开发出一种新型的microRNA（miRNA）的定量方法，即利用茎环反转录，Taqman PCR分析。茎环RT引物在RT 效率和特异性方面比传统的更好。TaqMan miRNA的检测是很具体的，可以检测成熟miRNA和区分相关的甚至低至一个核苷酸的miRNAs。此外，他们不会受到基因组DNA