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评估RNA分离的需要，我们直接在miRNA的检测中增加了细胞裂解物。相当于直接在7.5毫升逆转录反应中添加2.5-2500细胞。当检测到，在一些细胞中CT值相关R2>0.998）的RT反应至少有三个数量级（图4）。 图3。总RNA输入的阈值循环（CT）值检测8个miRNA的相关性。每RT反应中，小鼠肺总RNA输入范围从0.025到250纳克。将新杆状线虫的miRNA（MIR-2）列入作为阴性对照。 鼠或人的脑，心，肝，肺，胸腺，卵巢和胚胎（10-12天）的总RNA样品均购自Ambion公司。根据标准曲线lin-4合成的miRNA对每个细胞拷贝数进行估计。每个RT反应中添加150ng的RNA（或相当于约10 000个细胞，假设每个细胞中有15pg总RNA）。依据TaqMan磷酸甘油醛脱氢酶的内对照（P / N4352339E）将RNA规范化输入。 检测了12组非特定的基因组DNA对TaqMan miRNA的......阅读全文
Stem-loop实时定量RT PCR传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体，而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术，包括设计具有茎环（stem loop）结构的反
摘要：已开发出一种新型的microRNA（miRNA）的定量方法，即利用茎环反转录，Taqman PCR分析。茎环RT引物在RT 效率和特异性方面比传统的更好。TaqMan miRNA的检测是很具体的，可以检测成熟miRNA和区分相关的甚至低至一个核苷酸的miRNAs。此外，他们不会受到基因组DNA