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microRNA的实时定量茎环RTPCR技术（五）

TaqMan miRNA的检测能力不同，是依据采用let-7a, let-7b, let-7c, let-7d 和let-7e 5个合成miRNA来检测低至一个核苷酸（图7）。每个miRNA的检测对应每个miRNA。相对探测效率是通过计完全匹配和不匹配的目标CT之间的差异，假设完美匹配的效率为100％。观察非特异性信号处在非常低的水平，从零到0.3％，对于miRNA有2-3不匹配，0.1-3.7％的单核苷酸不同。许多交叉反应，是由RT反应反应中G-T的错配导致的。如果miRNA之间出现超过三个不匹配，会有针对性的miRNA检测。 我们比较歧视的TaqMan miRNA的检测能力的不同，以解决杂交分析为基础的检测（图8）。在我们的手中，杂交方法可以很好地区分let-7a和let-7b。然而，在let-7a, let-7c 和 let-7d之间，几乎没有区别，而是由1–3 nt区分。 我们推测，茎环引物可能会比线性引物提供更好的......阅读全文