Antpedia LOGO WIKI资讯

基因组DNA文库构建必备实验技巧

基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无疑问,高质量的基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。需要通过经验来选择合适的基因组DNA 分离方法,在分离 过程中保证DNA不被过度剪切或降解,同时也要尽量保证DNA的纯度。二、处理基因组 DNA 根据研究目的,研究者需要选择合适的载体。不同的载体对基因组DNA的长度有不同的要求,必须选择合适长度的基因组DNA来构建基因组文库。比如,对于黏粒载体,合适的片段长度大约为40kb;对于BAC载体,合适的片段长度平均为120kb-300kb。构建黏粒基因组DNA文库,需要将基因组DNA用注射器抽打来随机剪切DNA;接着用末端......阅读全文

基因组DNA文库构建必备实验技巧

基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无

基因组DNA文库构建必备实验技巧-2

技术支持资料:材料缓冲液和溶液- 碱裂解液I , 4°C50 mM 葡萄糖25 mM Tris-Cl (pH 8.0)10 mM EDTA (pH 8.0)配制碱裂解液I 约100ml,灭菌,保存在四度。- 碱裂解液II,新鲜配置,室温保存0.2 N NaOH (从10N的NaOH新鲜制备)1% (

基因组DNA文库构建必备实验技巧-1

基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无

基因组DNA文库构建的基本流程

基因组  DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。实验材料 T4 噬菌体 DNA 连接酶牛小肠碱

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

            实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中

基因组文库和cDNA文库的构建及筛选

刘芝华 中国医学科学院肿瘤研究所  分子肿瘤学国家重点实验室 概念: 基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体;cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。   基因组文库:来源于基因组DNA,反映基因

用 PCR 控制基因组 DNA 文库的质量实验

在该方案中,用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp),产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库,是通过利用表型的和生化的筛选方法,分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶处理后,基因组 DNA 片段成为平末端,然

消减 cDNA 或基因组 DNA 文库的制备实验

一次双向消减,需要总量为 2ug 的基因组 DNA 或 cDNA。大多数分离 RNA 和基因组DNA 的方法都适用于本实验(Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试

用 PCR 控制基因组 DNA 文库的质量实验

            试剂、试剂盒 ddH20 Vent 缓冲液 Vent DNA 聚合酶 dNTP 质粒 DNA