细胞冻存实验
实验方法原理细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻（图 20.8）。细胞用胰酶消化后，加入含有细胞保护剂的培养基，分装至冻存管中，然后将其夹到铝条上，用纸质管包裹，放入隔热储存管中。将储存管及其内容物于-70℃或-80℃存放4h或过夜，最后将含有冻存管的纸质管置入液氮罐的储存管中。实验步骤材料无菌准备冻存的细胞（如果是贴壁细胞：配制无菌PBSA和0.25%的粗胰蛋白酶）生长培养基（血清能促进冷冻后细胞的存活；血清浓度可达50%，或用纯血清。如血清使用于不需要血清的细胞时，在复苏后应清洗掉。）细胞保护剂，无杂志（见前）：二甲基亚砜保存于玻璃瓶中或聚丙烯管中，或新鲜准备的甘油，治愈普通容器中注射器：1~5ml，用于分装甘油（有毒）塑料小管，预先标记上细胞系的名称以及冻存日期非灭菌血细胞计数板或电子细胞计数器储存管或支架（支架可能已经在冻存器中了）冻存用的隔热容器：聚苯乙烯盒衬以脱......阅读全文
细胞冻存实验
方案20.1 冷冻细胞 实验方法原理 细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷
细胞冻存实验
实验方法原理 在不附加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内外环境中的水会结成冰晶，能导致细胞发生一系列变化，如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变、蛋白质变性等等，最终导致细胞死亡。但如向细胞培养液中加入保护剂甘油或二甲基亚砜（DMSO），可使冰点降低，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水分在
细胞冻存实验
实验方法原理细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻（图 20.8）。细胞用胰酶消化后，加入含有细胞保护剂的培养基，分装至冻存管中，然后将其夹到铝条上，用纸质管包裹，放入隔热储存管中。将储存管及其内容物于-70℃或-80℃存放4h或过夜，最后将含有
细胞冻存实验
细胞冻存实验可以用于：（1）妥善贮存细胞；（2）维持细胞生存；（3）节约人力、物力、时间及减少污染机会；（4）维持细胞发生遗传性状的稳定。实验方法原理细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷冻。细胞冻存时向培养基中加入保护剂，即终浓度5%.15%的甘
细胞冻存实验
方案20.1 冷冻细胞 实验方法原理 细胞生长至对数晚期，以培养基制备高浓度细胞悬液，加入细胞保护剂，等份转移至冻存管中，缓慢冷
复苏冻存细胞实验
方案20.2 复苏冻存细胞实验 实验方法原理 快速复苏细胞，缓慢稀释，以高细胞密度重新接种（图20.9）。
复苏冻存细胞实验
实验方法原理快速复苏细胞，缓慢稀释，以高细胞密度重新接种（图20.9）。实验步骤材料无菌培养瓶（如果需要离心时）生长培养基吸量管，1ml，10ml注射器和19号针头（如果你使用玻璃冻存管）非灭菌保护性手套和面罩37℃无菌水，10cm深，盛于清洁、用乙醇擦拭过的带盖的水桶中镊子70%乙醇棉签1%萘黑（
细胞的冻存与复苏实验_液氮冻存法
实验方法原理目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中（－196 ℃），保存时间可长达一年甚至几年，用时解冻，大多数细胞仍能生长繁殖，为妥善起见，细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂，否则，细胞内外的水会结成冰晶，使细胞发生机械损伤。加入保护剂后，可使冰点降低，在缓慢冻
细胞冻存和复苏实验
细胞冻存和复苏可以：（1）用于生物学保种；（2）用于医学上干细胞研究；（3）用于传代培养。实验方法原理细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减
细胞冻存与复苏实验
实验原理：冻存和复苏的原则：慢冻快融。当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重