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RTPCR之外的新冠肺炎诊断方法

目前关于新冠肺炎的检测方法主要以核酸检测为主,而核酸检测主要为传统的荧光定量PCR方法,需要进行反转录、荧光定量等操作步骤,操作过程繁琐,且有出现检测结果假阴性的概率。而在针对保证灵敏度和特异性的基础上,关于新冠病毒的核酸检测技术也在进一步优化。 恒温扩增 2月12日,中国新闻网报道上海理工大学与合作企业协同研发出恒温荧光检测试剂盒;山东师范大学生命科学学院表明研制出新冠病毒快速检测试剂盒,该试剂盒主要采用恒温扩增技术,实现“一次开盖一步操作”,简化了操作步骤,缩短了扩增检测时间,整个检测过程只需要不到20分钟。此外,大连民族大学也表明研发出新冠病毒恒温荧光快检法,开展了种内保守性比对,种外同源性比对以及差异位点分析,设计并筛选确定了2条内引物、2条外引物及2条环引物为核心技术,增强了恒温荧光扩增技术的特性性以及灵敏度保证。数据显示,该方法检测灵敏度可以稳定达到1fg/μL,与现在较为通用的RT-PCR法相比具有......阅读全文

RT-PCR之外的新冠肺炎诊断方法

  目前关于新冠肺炎的检测方法主要以核酸检测为主,而核酸检测主要为传统的荧光定量PCR方法,需要进行反转录、荧光定量等操作步骤,操作过程繁琐,且有出现检测结果假阴性的概率。而在针对保证灵敏度和特异性的基础上,关于新冠病毒的核酸检测技术也在进一步优化。   恒温扩增   2月12日,中国新闻网报道

定量RT-PCR (Quantitative RT-PCR)

Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of m

RT-PCR实验方法

RT-PCR定义:是指对组织或细胞的总RNA进行抽提,把RNA反转录为cDNA,然后设计目的基因引物进行PCR,琼脂糖电泳并数码拍照,分析电泳条带灰度值,判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 RT-PCR流程简介 一、抽提RNA: 1、防止RNA酶污染 180℃的高温下

RT-PCR技术简介和RT-PCR引物的选择

RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD

microRNA RT-PCR实验方法

Stem-loop实时定量RT PCR传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体,而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术,包括设计具有茎环(stem loop)结构的反

半定量RT-PCR (Semi-Quantitative RT-PCR )

RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5

PCR(RT-PCR)反转录 定性检测方法

  1、试剂  (1)10倍 RT 缓冲液:500mmol/L Tris·Cl(pH8.0),0.60 mmol/L MgCl2,400mmol/L KCl,10mmol/L DTT。  (2)10倍 PCR 缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.3),500mmol/L kCl,15

RT-PCR的原理

原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT- PCR(Re

RT-PCR PROTOCOL

RT-PCR PROTOCOL材料与方法…………………………………………………………    1.材料 ………………………………………………………1.1 供试用组织(细胞)…………………………………1.2 主要仪器设备…………………

Standard RT-PCR

RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In&nbs