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抗原制备

不管是制备单抗还是多抗,抗原的设计与制备都是一个非常重要的问题,设计或者制备得不好的抗原有可能完全不能免疫出抗体来。一个良好的抗原必须具体的条件:(1)分子足够大。对于多肽或蛋白质类的抗原来说,一个抗原决定簇(又叫表位,epitope),通常由6-8个氨基酸残基组成。而平均每5-10kD才有一个表位,因此分子太小的多肽或蛋白是很难有一个表位的。(2)外源性强。在个体形成的早期就对自身物质形成了免疫耐受,因此如果和机体内的物质完全一样或者是相似就很难引起机体的免疫应答。如果是利用免疫赦免区的成份(如大脑、眼球、睾丸内部成份)则不必考虑外源性。(3)结构尽量复杂。简单重复的物质是不具有免疫原性的,拿明胶来说,它的分子量非常大,而且外源性也很强,但是组成明胶的氨基酸多为直链氨基酸,在体内容易被降解,因此它的免疫原性很弱。类似地,淀粉、核酸、多聚Lys的免疫原性也很弱。(4)可降解性好。作为抗原,必须是可以降解的,塑料、不锈钢等难降解的......阅读全文

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

免疫原的制备

一、 颗粒性抗原的制备 颗粒性抗原是指细胞抗原或细菌抗原。 二、 可溶性抗原的制备和纯化 (一) 组织和细胞抗原的粗制 1. 新鲜的组织或器官,经高速组织捣碎机研磨、酶消化、离心等手段,而获得单个细胞。 2. 组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备&nb

小分子抗原制备要点和注意事项-1

小分子抗原现在做的最多的是农药和兽药,这方面的文献也很多。以前查过一些材料,作者觉得小分子抗原能否制备出高性能的单克隆抗体主要以下几点决定。 1、对于半抗原结构的选择,如果待测物本身含有NH2,COOH,OH等活性基团,可以利用待测物活性基团加入间隔臂,然后联入载体蛋白就可以成功合成人工抗

小分子抗原制备要点和注意事项-2

在Eva M.Brun等(2004)的实验中,根据待测物杀螟松的结构设计了多种半抗原的组合,具有特异性的结构的是用椭圆标记出来的,在连接偶联臂时就要充分考虑暴露这一重要的抗原表位,研究中通过对比接入偶联臂的不同结构的半抗原,显示充分暴露该结构的F7半抗原制备人工抗原免疫动物得到的多克隆抗体,具有

抗TP抗体筛查试验的假阳性问题及其对策

  一、梅毒体外诊断试验  1.梅毒的体外诊断试验分类  梅毒的体外诊断试验按试验所用抗原分为非密螺旋体抗体试验(nontreponemal antibody test, NTrAT)和密螺旋体抗体试验(treponemal antibody test, TrAT)。NTrAT包括快速血浆反应素环状

佐剂(adjuvant)的制备和作用

一、概念  佐剂(adjuvant)是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质,应用时可与抗原同时或预先注射于机体。佐剂本身可以有免疫原性,也可以没有免疫原性。 应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性,从而提高抗体的效价。颗粒性抗原(如细菌、细胞)因具有较强的免疫原性,一

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

ICC用细胞抗原的制备

一、材料和试剂1、0.01M PBS(pH7.4): NaCl 8.0g; KCl 0.2g; Na2HPO4 1.44g; KH2PO4  0.24g; ddH2O至1000ml ; 高压灭菌,分装。2、0.25%胰酶:称取EDTA 0.02g   NaCl

抗原的制备方法

实验概要除完整的细胞可作为抗原外,各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质,也都具有全抗原或半抗原的性质,某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的,可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质,有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质,以供科学研究之用。实验步骤一、抗原的提取  

抗原的制备方法

实验步骤一、抗原的提取  抗原的制备是一件十分细致的工作,要制备一个高纯度的抗原,需要付出艰巨的努力,制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎科二个方面:①利用混合物中几个组分分配率的差别将他们分配到可用机械方法分离的两或几个物相中

抗原的制备方法

实验步骤一、抗原的提取抗原的制备是一件十分细致的工作,要制备一个高纯度的抗原,需要付出艰巨的努力,制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎科二个方面:①利用混合物中几个组分分配率的差别将他们分配到可用机械方法分离的两或几个物相中,如

初步探讨ELISA的分类和发展

引言 1971年瑞典的Engvall等人分别以纤维素和聚苯乙烯试管作为固相载体吸附抗原/抗体,建立了酶联免疫吸附测(Enzyme Linked Immunosrbent Assay,简称ELISA),后来人们改用板式反应孔进行ELISA,大大地提高了实验通量。ELISA实验具有极高的灵活性

新冠抗原抗体检测

  疫情动态  根据世卫组织最新实时统计数据,截止小编撰稿,目前全球确诊新冠肺炎2248654例。世卫组织发言人玛格丽特·哈里斯14日表示,疫情尚未到达顶峰,就单个国家而言,目前美国的新冠疫情是全球最严重的,美国新冠肺炎确诊病例已超过73万,意大利确诊病例累计175925例,西班牙确诊病例达1944

抗原的制备-1

抗原的制备  除完整的细胞可作为抗原外,各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质,也都具有全抗原或半抗原的性质,某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的,可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质,有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质,以供科学研究之用。  一、抗原的提取 

抗原的制备方法

抗原的制备  除完整的细胞可作为抗原外,各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质,也都具有全抗原或半抗原的性质,某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的,可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质,有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质,以供科学研究之用。  一、抗原的提取 

免疫金标记技术在体外诊断领域的应用

生产企业必须能够克服大量的技术难题才能制备出能应用于诊断领域的免疫金复合物。免疫金标记技术是一种将胶体金颗粒与包括抗原、抗体在内的许多蛋白质标记形成免疫金复合物的技术。虽然这种免疫金标记技术呈 现出多种多样的应用方式,但目前主要应用是以快速检测试纸盒的形 式使用于疾病的诊断和监测。1在过去的十年里,

抗血清的制备(一)

一、目的:  1、了解抗血清制备的基本过程:  2、掌握抗血清的收集和保存方法。  二、原理:  抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。

初探ELISA的分类和发展(二)

图3直接夹心ELISA原理对于双抗夹心ELISA,待检对象必须包括两个或者两个以上的表位,否则检测抗体无法与待检抗原结合,例如半抗原和小分子抗原都是不能用双抗夹心ELISA检测的。对于双抗原夹心ELISA,其操作与间接ELISA基本相同,但利用特异性的抗原代替酶标二抗,所以特异性比间接法更好。另外,

小分子药物单克隆抗体制备

在单克隆抗体制备中,首先进行的就是抗原的设计与合成,这是制备单抗成功与否的关键。因为产生抗体的特异性与亲合性是与抗原密切相关的,合成的抗原如果可以将所需要的抗原决定簇充分暴露出来,那么机体更容易识别抗原决定簇,从而免疫的动物所产生的抗体自然会在特异性和亲合力上最大程度的与抗原决定簇拟合。所以,在制备

单克隆抗体的制备实验

单克隆抗体的制备实验可以用于:(1)将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体;(2)该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo

ELISA原理与分类介绍(四)

3.1.3  包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等(例如A

杂交瘤技术基本程序与方法-1

一、杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果,抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等,为杂交瘤技术提供了必要理论基础,同时,骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。19

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

ELISA试剂盒竞赛法检查抗原和抗体

牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒竞赛法检查抗原当小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的抗体位点,因而不能用双抗体夹心法进行测定,能够选用竞赛法形式。办法的基本原理可见图2,经洗刷后分成两组:一组加酶符号抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶符号抗原,再经孵育洗刷后加底物显色,这两组底物

免疫血清制备方法

免疫血清的制备可用于:(1)制备免疫标记抗体等;(2)供特异性免疫治疗用等。实验方法原理具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别,因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体,实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗

如何选择合适的单、多克隆抗体及抗原

   多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆,产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,即多克隆抗体。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体

如何选择合适的单、多克隆抗体及抗原?

多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb):用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物,可刺激机体多个B细胞克隆,产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,即多克隆抗体。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗

抗原的分类

  一、天然抗原  根据抗原性物质与机体的亲缘关系可分为“自己”(self)与“非已”(non-self)抗原。即与机体种系发生关系愈远,其遗传性差异越大,其免疫原性也愈强。  (一)“自己”抗原  正常自身组织成分及体液组分处于免疫耐受状态,不能激发免疫应答,但如打破自身耐受,则可引起自

多克隆抗体的制备、纯化及免疫电泳-1

一、多克隆抗体的制备【实验原理】当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。将抗原导入敏感动物体内

抗独特型抗体及其在医学研究中的应用(一)

  针对外来抗原的抗体分子(Ab1)可变区上Id可刺激机体产生相应的抗Id抗体(Ab2)。Ab2β具有与外来抗原相似的氨基酸排列顺序或空间构型,它能够在体内模拟始动抗原的作用。应用Ab2β的这一特性,可有目的地制备Ab2β,将其作为抗原的替代物用于基础和临床医学研究。  一、抗独特抗体的制