PCR基础原理——“织围巾”
PCR 简单来说就是在合适条件下,热变性-复性-延伸过程的不断重复。整个过程有点像是织围巾,但也不完全是这样。织围巾(PCR)所必须的原材料有这样几个元素织样(模板)、起针(引物对)、毛线(dNTP)和针(Taq酶以及缓冲体系)。首先要将织样拆解开(通过95℃高温,将DNA双链拉链状解链),然后将实现织好的起针配合在织样上(通过退火将合成的引物结合在单链的模板上),按照织样(模板),沿着起针(引物)用毛衣针(Taq酶)将毛线(dNTP)一针针连接上去(72℃下延伸扩增)。通过对所有织样(包括原先的模板及新形成的模板)的拆解(解链)及新的起针(引物)搭配(结合)、编织(Taq酶扩增)这样循环n次后,围巾的数量就以2的n次方(产物量就以2的n次方)增多了。PCR试验最早是以Klenow片段进行扩增的,由于这种酶高温会变性,所以最早的PCR实验员是很苦逼的,每个循环都需要开盖、加酶、换水浴锅,这样35个循环……后来发现了Taq酶之后,......阅读全文
PCR基础原理——”织围巾“
PCR 简单来说就是在合适条件下,热变性-复性-延伸过程的不断重复。整个过程有点像是织围巾,但也不完全是这样。织围巾(PCR)所必须的原材料有这样几个元素织样(模板)、起针(引物对)、毛线(dNTP)和针(Taq酶以及缓冲体系)。首先要将织样拆解开(通过95℃高温,将DNA双链拉链状解链),然后将实
PCR基础原理——“织围巾”
PCR 简单来说就是在合适条件下,热变性-复性-延伸过程的不断重复。整个过程有点像是织围巾,但也不完全是这样。织围巾(PCR)所必须的原材料有这样几个元素织样(模板)、起针(引物对)、毛线(dNTP)和针(Taq酶以及缓冲体系)。首先要将织样拆解开(通过95℃高温,将DNA双链拉链状解链),然后将实
PCR的基础原理
PCR的基础原理*章 PCR和RT-PCR基础PCR基础聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性,引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程,因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般,经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴
免疫PCR(Immuno-PCR)概念和基础
(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng
PCR基础知识指南
近年来,PCR技术在“微量证据”方面大放异彩,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。然而这仅仅只是我们对PCR技术探索、应用的一小部分,它的潜在价值不可限量,还需要人类的不断研究。聚合酶链式
荧光定量PCR几个基础概念
基线:是指扩增曲线的水平部分。是指在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大。接近一条直线,这样的直线即是基线。每个样品孔都设置独立基线。阈值:是一个荧光强度值,荧光域值必须设定在 PCR扩增的指数期。阈值线:穿过阈值与X轴平行的直线称为阈值线;Ct值:是阈值线与扩增曲线的交点对应在X轴上的
TAIL-PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)基础知识
很早就有用随机引物的PCR,但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生,所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL- PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR,则解决了这个问题,后来有研究表明,经改良过的TAIL-
网织红细胞计数的检测原理
网织红细胞计数的检测原理是临床检验主管技师的一部分内容,医学教育网整理了这一部分内容,希望对考生有所帮助。 网织红细胞(Ret,RET)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞,属于尚未完全成熟的红细胞,其胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA),经活体染色(新亚甲蓝、灿烂甲酚兰(煌焦油蓝
以PCR为基础的相关技术
(一)巢式PCR 定义: 是对靶基因进行二次扩增,第二次扩增用的模板就是第一次的扩增产物。 应用: 可以得到足够和特异性的扩增产物,在靶基因表达量比较低或者一些其他原因导致的,使用常规的PCR无法得到理想的产物得时候。 注意事项: (1)第二次扩增的时候,必须至少有一条引物是另外设计
Real-time PCR 基础知识
理论基础 聚合酶链式反应作为一种革命性的方法在生物学研究的历史中占据了重要的地位。以此为基础发展出包括real-time PCR在内的多项应用技术。自诞生后real-time PCR技术持续发展,从简单的增扩到整个PCR过程,real-time PCR表现出比PCR更敏感、更明确的定量分析特