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植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验

实验材料黄化苗试剂、试剂盒匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材分光光度计实验步骤在选好植物材料和匀浆缓冲液后，接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等（见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方法，或者几种匀浆法结合运用。( 1 ) 直接用预冷的研钵和研槌进行匀浆。( 2 ) 在烧杯中用 Moulinex 混合器匀浆 20~60s，或者用 Polytron 搅拌器在 50% 的全速下搅拌 5 次，每次 2s。( 3 ) 在陶瓷搅拌器中高速下搅拌 15s，或低速下搅拌 2 次，每次 15s。( 4 ) 用商用蔬菜或水果榨汁机将块茎直接榨汁到 5X 匀浆缓冲液中。( 5 ) 直接用搓板在匀浆缓冲液中将材料搓碎。3.2 缓冲液 pH 以及与材料的比例( 1 ) 使用前匀浆缓冲液的 pH 必须调到 7.8 左右，以确保在细胞破碎后的整个系统......阅读全文