WIKI资讯
WIKI资讯
过氧化物酶催化以下反应： 2 H2O2 →O2+2H2O 这一类酶以铁卟啉为辅基，所以属血红素蛋白质类（hemeProteins）。过氧化物酶在生物界分布极广，在细胞代谢的氧化还原过程中起重要的作用。 本实验是以辣根为原料，经过水的抽提，硫酸铵和丙酮分级分离，再经锌离子纯化，透析除盐，冷冻干燥，最后制得高纯度的辣根过氧化物酶。 辣根过氧化物酶分子量在40,000左右，是一种含亚铁血红素的蛋白质，等电点7.2；易溶于水，溶解度为5%（W/V），溶液呈棕红色，透明；也溶于0.58饱和度以下的硫酸铵溶液，而0.62饱和度以上则不溶。该酶最适pH为7.0（对愈创木酚为氢给体而言）。在室温下HRP在几周内保持稳定，加热到63℃后15分钟内稳定。 辣根过氧化物酶氧化还原电势很低，pH6.08时，E’0= -0.2070V；pH为7.71时，E’0= -0.5787V。 辣根过氧化物酶的作用机理可分以下几步： 第一步，形成绿......阅读全文
过氧化物酶催化以下反应： 2 H2O2 →O2+2H2O 这一类酶以铁卟啉为辅基，所以属血红素蛋白质类（hemeProteins）。过氧化物酶在生物界分布极广，在细胞代谢的氧化还原过程中起重要的作用。 本实验是以辣根为原料，经过水的抽提，硫酸铵和丙酮分级分离，再经锌离子纯化，透析除盐，冷冻
1、活力测定：测定k4值的方法操作如下： 取2个比色池（带盖，光程1厘米），按下表加入反应物 *酶液：将1毫克蛋白/毫升的酶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍后应用。 加好反应物，摇匀，在470nm 读出OD值，为t=0 的读数。立即加0.01毫升40mM过氧化氢溶液于2个比色池中，即刻摇匀并记时
⒈水提取： 称取 10斤用水冲刷干净的鲜辣根（辣根皮中亦含有丰富的HRP），用菜刀切成小碎块，在搅肉机中搅碎1~2次。碎渣浆用1倍体积的水在低温下搅拌提取过夜（亦可采用高速抽提法）。次日用甩干机（或离心机）甩干，收集滤液，碎渣再用1/4倍体积水浸泡提取一次，合并两次滤液，量总体积和度，0。
(1)将盖玻片、载玻片或培养板置于水平面上；如为1h或1h以下的短程孵育，则勿需湿孵，可将盖玻片或载玻片直接放置在实验台上。多个盖玻片则需置于Parafilm膜上，因为Parafilm膜有弹性，能够防止抗体溢出盖玻片边缘，也便于镊子操作。但如果圆形盖玻片数量过多，最好将其置于细胞生长与固定的2
底物范围较广，包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺／金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产
实验概要本实验介绍了辣根过氧化物酶标记试剂对三种底物的使用方法。辣根过氧化物酶标记试剂底物范围较广，包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑(AEC)等。实验原理1. DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属
辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP），是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，也广泛运用于免疫类（ELISA）试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。 辣根过氧化物酶（Horseradish Per
过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含量最高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此
仪器 离心机、干燥器、分光光度计。 试剂 ⒈ 硫酸铵：工业纯和化学纯； ⒉ 丙酮。 ⒊ 10mM pH7.0磷酸盐缓冲液：称取243.5毫克磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）和857毫克磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于400毫升水中。 ⒋ 20mM愈创木酚溶液：取0
1、活力测定：测定k4值的方法操作如下： 取2个比色池（带盖，光程1厘米），按下表加入反应物 *酶液：将1毫克蛋白/毫升的酶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍后应用。 加好反应物，摇匀，在470nm 读出OD值，为t=0 的读数。立即加0.01毫升40mM过氧化氢溶液于2个比色池中，即刻摇匀并记时