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来自耶鲁大学的PCR常见问题的精辟总结

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. COMPONENTVOLUMEFINAL CONCENTRATION1.autoclaved ultra-filtered water (pH 7.0)20.7µL-2.10x PCR Buffer*2.5µL1x3.dNTPs mix (25 mM each nucleotide)0.2µL200 µM (each nucleotide)4.primer mix (25 pmoles/µL each primer)0.4µL0.4 µM (each primer)5.Taq DNA polymerase (native enzyme)0.2µL1 Unit/2......阅读全文

来自耶鲁大学的PCR常见问题的精辟总结

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. COMPONENTVOLUMEFINA

PCR常见的问题总结

     PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些zui好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有: ①模板核酸的制备; ②引物的质量与特异性; ③酶

PCR常见问题

PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋

PCR常见问题

PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋

蛋白纯化常见问题总结

蛋白纯化过程中常遇见一些问题,这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白,纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列,没有问题。细胞破碎后,融合蛋白在沉淀里,我用助

Western Blot常见问题总结

  Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与或标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电

蛋白纯化常见问题总结

蛋白纯化过程中常遇见一些问题,这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白,纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列,没有问题。细胞破碎后,融合蛋白在沉淀里,我用助

PCR常见问题汇总

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶

PCR常见问题总汇

PCR产物的电泳检测时间   一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带   PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。   模板:①模板中含有

耶鲁大学开发出糖基化的新方法

  许多治疗药物和生化探针的生产都离不开糖基化的过程,也就是在蛋白质或脂类上面附加糖类的过程。不过,此过程具有高度特异性,因此这些化合物的大规模生产相当困难。  耶鲁大学的研究人员近日在《Nature Chemistry》上发表了一篇题为“Rapid phenolic O-glycosylation