微生物实验室技术基因探针技术
基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳定的DNA?RNA或DNADNA链的原理,采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。如法国生物一梅里埃公司的GEN?PROBE基因探针检测系统,对于分离到的单个菌落,30 min完成微生物的确证试验,基因探针的缺点是不能鉴定目标菌以外的其他菌。......阅读全文
微生物实验室技术--基因探针技术
基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳定的DNA?RNA或DNADNA链的原理,采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。如法国生物一梅里埃公司的GEN?PROBE基因探针检测系统,对于分离到的单个菌
微生物实验室技术--PCR技术
PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段,再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高,理论上可以检出一个细菌的拷贝基因,因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌,即可通过PCR进行筛选,节约了大量时间,但PCR技术也存在一些缺点:食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制
基因探针的技术分类及应用特点
探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA（或RNA）分子，与被测定的靶序列互补，以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、RNA
微生物实验室技术--免疫学技术
免疫学技术通过抗原和抗体的特异性结合反应,再辅以免疫放大技术来鉴别细菌。免疫方法的优点是样品在进行选择性增菌后,不需分离,即可采用免疫技术进行筛选。由于免疫法有较高灵敏度,样品经增菌后可在较短的时间内达到检出度,抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成。此技术对操作者要求也不高,是目前为止基层单位应用
RNA探针技术简介
许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP，则可合成RNA探针。RNA探针一般都是单链,它具有单链DNA探针的优点,
简述核酸探针技术及其在微生物检测中的应用
随着分子生物学和分子化学的飞速发展，对病原微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针（Nuclear acid probe）以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的
“DNA探针”的技术依据
DNA探针根据其来源分为3种:一种来源于基因组中的基因本身,称为基因组探针(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一种是从相应的基因经转录获得mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针(cDNA probe);此外,还可在体外人工合成20～50个碱基的与基
荧光探针技术的概念
受到激发光激发后，从激发态单重态回到基态，在紫外-可见-近红外区有特征发光，称之为荧光。荧光性质（激发和发射波长、强度、寿命、偏振等）可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子，被称为荧光探针。荧光探针分类很多，可以根据材料属性分为有机和无机探针，可以根据探针尺寸分为
微生物实验室通用无菌技术
无菌技术是一套常规措施，旨在防止培养物，无菌培养基储备和其他溶液受到有害微生物（即败血症）的污染。尽管有时将这种行为称为“无菌技术”，但该术语仅在防止将任何生物引入实验室或医疗设备和试剂（例如在手术过程中）时才是适当的。由于生物学家的目标是在不引入外来生物的情况下培养微生物或真核细胞，因此无菌技术对
实验室微生物检测技术--微生物计数法
1、血球计数板法: 血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四条沟和两条嵴,中央有一短横沟和两个平台,两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm,每个平台上刻有不同规格的格网,中央0.1 m㎡面积上刻有400个小方格.通过油镜观察,统计一定大格内微生物的数量,即可算出1毫升菌液中所含