一般冻存盒中加入甘油的居多吧。丙二醇,异丙醇加入后,一方面防止由于溶液效应而使细胞脱水及蛋白质变性;另一方面在稍低于溶液冰点时人工强行诱导结冰,以免出现溶液过冷现象,防止结冰时释放潜热引起温度回升,以及形成大的冰晶,减轻对细胞的损伤。在一步冷冻中.选用高浓度的渗透性保护剂组成的玻璃化溶液,在冷冻过程中,不发生结晶而形成玻璃样固体,维持液态时的正常分子与离子分布,使细胞内发生玻璃化而起到保护作用。......阅读全文
方案20.1 冷冻细胞 实验方法原理 细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细
细胞的冻存 实验方法原理 已长满的细胞经胰蛋白酶处理后,重悬于冻存液中。两种试剂即甘油和 DMSO 是常用的细胞保护剂,它
实验方法原理 已长满的细胞经胰蛋白酶处理后,重悬于冻存液中。两种试剂即甘油和 DMSO 是常用的细胞保护剂,它们在细胞保存液中起到防止细胞内冰晶形成的目的。血清的浓度经常增加至 20%。实验步骤 1) 吸干已长满细胞的细胞瓶内培养液。细胞不应在高密度状态下冻存,并应在冻存的 24 小时内换液。2)
一、材料 (一)仪器 1.净化工作台 2.离心机 3.恒温水浴箱 4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃) 5.倒置相差显微镜 6.培养箱 7.液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1.吸管(弯头、直头) 2.培养瓶 3.玻璃瓶(250ml、100ml) 4.废液缸 (三)塑料器皿 1
实验方法原理 在不附加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内外环境中的水会结成冰晶,能导致细胞发生一系列变化,如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变、蛋白质变性等等,最终导致细胞死亡。但如向细胞培养液中加入保护剂甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使冰点降低,在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水分在
一、材料 (一)仪器 1.净化工作台 2.离心机 3.恒温水浴箱 4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃) 5.倒置相差显微镜 6.培养箱 7.液氮冰箱 (二)玻璃器皿 1.吸管(弯头、直头) 2.培养瓶 3.玻璃瓶(250ml、100ml) 4.废液缸 (三)塑料器皿 1
实验方法原理细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷冻(图 20.8)。细胞用胰酶消化后,加入含有细胞保护剂的培养基,分装至冻存管中,然后将其夹到铝条上,用纸质管包裹,放入隔热储存管中。将储存管及其内容物于-70℃或-80℃存放4h或过夜,最后将含有
细胞冻存实验可以用于:(1)妥善贮存细胞;(2)维持细胞生存;(3)节约人力、物力、时间及减少污染机会;(4)维持细胞发生遗传性状的稳定。实验方法原理细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷冻。细胞冻存时向培养基中加入保护剂,即终浓度5%.15%的甘
细胞的冻存实验主要用于:(1)长时间保存细胞系;(2)防止细胞保存液内产生冰晶。实验方法原理已长满的细胞经胰蛋白酶处理后,重悬于冻存液中。两种试剂即甘油和 DMSO 是常用的细胞保护剂,它们在细胞保存液中起到防止细胞内冰晶形成的目的。血清的浓度经常增加至 20%。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶冻存
方案20.1 冷冻细胞 实验方法原理 细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷