BHA和BHT混合使用时分离与测定方法

BHA和BHT混合使用时分离与测定方法，分别显色比色法

1.原理    

用石油醚提取食品中的BHA和BHT。通过硅胶柱使BHA和BHT分离，BHA与2,6---二氯醌氯亚胺-

硼砂溶液生成兰色。BHT与2，2^，---联吡啶---氯化铁溶液生成橘红色发色团，与标准比色定量。

2..试剂   

⑴ 0.01% 2，6---二氯亚胺乙醇液，采用无水乙醇配置存于棕色瓶中，冰箱保存可存三天。

⑵硼砂缓冲溶液：取硼砂0.6g氯化钾0.7g, NaOH 0.26g 加无水乙醇至500ml，过滤即可使用。

⑶0.2 % а,а’-联吡啶溶液：称取а，а’-联吡啶0.2g置于烧杯中，加入2ml乙醇，定100ml。

⑷02.%FeCL₃溶液：24 小时后重新配置。

⑸30%乙醇液

⑹石油醚 30-60℃

⑺硅胶，柱层析用，不活化。

⑻BHA溶液  称BHA 0.050g→加少量无水乙醇溶解后→转移100ml棕色容量瓶用无水乙醇定容→避光保存→此液为0.5mg/ml临用时取1ml于50ml容量瓶→加无水乙醇定容→为10微克/毫升的BHA

⑼BHT标液：称BHT0.1000g→少量无水乙醇溶解后→定容100ml（用无水乙醇定容）→为1.0mg/ml→取1ml定容100ml（用无水乙醇定容）→为10微克/毫升

3.方法（整个过程要避免光照进行）

1)样品处理 

取磨碎样10g→于带塞三角瓶→加石油醚50ml→振摇20分钟→静止后取上层液25ml→通过硅胶柱用石油醚淋洗→收集150ml淋洗液→作为BHT检验液→取出5ml 于蒸发皿中自然挥干→用30%乙醇6ml洗涤滤纸→滤液于洗液合并于比色管→供BHT测定。 无水乙醇淋洗以石油醚淋洗后的硅胶柱，至淋洗液为100ml，供BHT测定。

2）          测定:

a)BHT 的测定：

标准曲线的绘制

取6个比色管编号   1    2    3    4    5      6   

分别吸BHT标液        0.0     0.5     1.0      1.5     2.0         2.5

30%乙醇液        ———→1ml←—————————

加0.2%2，2-联吡啶 ———→1ml←———————

暗室中加2，2-FeCl₂ ———→1ml←———————

放置60分钟进行比色（波长520nm），绘制标准曲线

样品的测定：取上面BHT测定液20ml→于比色管→加30%乙醇至8ml→加0.2% 2，2---联吡啶1ml→以下按标准曲线绘制

b)BHA的测定

标准曲线的绘制，取6个比色管编号，1     2     3    4    5      6

                               吸取BHA标液       0.0   0.5  1.0  1.5  2.0   2.5

 加无水乙醇     ———→稀释总体积8ml←—

 加0.01%2，6-二氯醌氯亚胺    ———→1ml←—

 硼砂缓冲溶液        ———→2ml←—————

静止20分钟于620nm测定消光值，绘制标准曲线

样品的测定：取BHA测定液4ml→于比色管→用无水乙醇稀释至8ml→以下同标准曲线的绘制。

4.计算： BHT或BHA(μg/kg)=V/W*V₂/V₁*C/V₃*1000/1000

C-----测定用样液中BHA或BHT的含量(μg)

V-----BHA或BHT混合时的总体积（ml）

V₁ ---BHA或BHT分离时的体积（ml）

V₂----BHA或BHT分离后的定容体积（ml）

V₃----BHA或BHT分离后的测定用量 （ml）

W-----样品重量（g）

1000---将μg换算成 mg

1000----表示单位（将g换成Kg）

5.注意事项：

⑴抗氧化剂本身会被氧化，样品随着存放时间的延长含量会下降，所以样品进入实验室应尽快分

析，避免结果偏低。

⑵抗氧化剂BHT稳定性较差，易受阳光，热的影响，操作时应避光。

⑶用柱层分离含油脂多的食品，会受到温度的影响，室温度低，流速缓慢，使分离效果受一些影

响，最好温度在20℃以上进行分离。