BZ010水稻Cry1Ac基因序列定性PCR检测试剂盒检测说明

BZ010 -水稻Cry1Ac 基因序列定性PCR 检测试剂盒
包括100 个扩增反应所需的试剂

【试剂盒组成】

2 x 275 μl Cry1Ac 反应试剂 (Cry1Ac mastermix; -20oC 保存)

1 x 50 μl 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存)

【保存条件】

1.反应试剂和阳性对照应储存在 -20°C。保质期标注在盒子上。

2.请分装PCR 反应试剂，以避免重复冷冻和解冻。频繁的解冻和冷冻可能导致成分失去活性。

3.使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。

【操作过程】

1．在冰上解冻PCR 反应试剂。

2．准备反应试剂：

3．加入适当份量的DNA 模版和双蒸水。

每次PCR 检测都应该设置阳性对照（2 μl）和阴性对照（2 μl 水）

每个检测样品应该设置两个PCR 重复反应

为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有PCR 抑制物而导致PCR 呈阴性反应，建议在测试样本中加1 μl 的阳性对照作为spiking 对照 (spiking control)，同时进行PCR 反应。

4．将准备好的PCR 管放置在PCR 仪中，按照特定循环条件运行。

5．实验数据分析

PCR 的产物需要通过琼脂糖凝胶电泳检测。

产物长度: 1000 b.p.

阴性的实验结果有几个可能性：

本中不存在目的片段；

样本中目的片段的量低于检测值；

样本中存有 PCR 抑制物。

Spiking 对照

试剂盒中设计spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生PCR 抑制。如果样本中加了阳性对照以后得出阴性结果，说明样本中存在PCR 抑制物，那幺此次阴性的实验结果就不能作为正确的结果，需要重新开始样本核酸的提取和PCR 扩增。