Bio-Rad公司近日推出了一款“高级”的cDNA合成试剂盒,适用于定量PCR前的cDNA合成。此款名为iScript Advanced cDNA synthesis kit的试剂盒能帮助研究人员生成更多的定量PCR数据,用于基因表达分析。
一般的逆转录试剂盒只能对1 µg总RNA进行逆转录,而iScript Advanced cDNA synthesis kit最多能对7.5 µg总RNA进行逆转录,大大超越了同类产品。这种在单个反应中逆转录更多RNA的能力有助于改善重复性,降低每个qPCR数据点的成本,并增加某些目的基因的灵敏度。
起始RNA增加了,获得的cDNA自然也就更多。这样,单个RT反应的产物就足够所有目的基因的qPCR分析,包括看家基因,减少了反应间的差异,提高了重复性。逆转录反应生成的20 µl cDNA可稀释100倍,以96孔板的qPCR反应来计,每孔加入2 µl cDNA,那么逆转录反应生成的cDNA最多能产生1000个数据点,从而降低了每个数据点的成本。
iScript Advanced cDNA synthesis kit在使用起来也非常简便。它只有两支管,包括iScript Advanced预混液和iScript Advanced逆转录酶。预混液中包含了RNase抑制剂,在反应体系建立和逆转录过程中能防止RNA降解。此外,Oligo(dT)和随机引物的最优组合带来出色的RNA覆盖。此款试剂盒也非常快速,只需35分钟即可完成逆转录。合成的cDNA可用于各种实时定量PCR(SYBR Green、EvaGreen或探针)及传统的PCR。
iScript Advanced cDNA synthesis kit属于iScript逆转录产品家族中的一员,此家族还包括:
• iScript cDNA synthesis kit:经典的两管式逆转录试剂盒,能对1 pg至1 µg的总RNA进行逆转录,40分钟可完成反应。
• iScript reverse transcription supermix:一管式的逆转录预混液,能对100 fg至1 µg的总RNA进行逆转录,适合高通量应用。
• iScript Select cDNA synthesis kit:您可以自由选择逆转录引物,包含单独的Oligo(dT)、随机引物和GSP引物增强液,能对1 pg至1 µg的总RNA进行逆转录。
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