ELISA的标准曲线究竟怎么做

 在ELISA实验结束后，我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值。其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度，以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。这样，我们把样本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即样本浓度。          
下面我们就一步步来实现这个目标：
1.首先，将数据整理好输入Excel，分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。  

2.拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“XY散点图”，并选择子图表类型的“散点图”(第一个没有连线的)，如下图所示。

3.点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。

4.在做ELISA标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本OD值是已知的，因此我们需要将OD值设为X。根据上图我们可以看到，横坐标X值为OD值，纵坐标Y为标准品浓度，这正是我们想要的。
有时需要我们手动选择X值，这时可以点击“系列”来更改，如下图。

如果要对横坐标和纵坐标进行调换，我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标，结果如下图：

出现上图后，拖动鼠标选取正确的数据区域以调整X或Y。
5.调好之后，然后点击“下一步”出现图标选项界面，如下图。

6.点击“下一步”，在弹出的窗口再点击“完成”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。

7.到了这一步，散点图便完成了。曲线在哪里？
其实很简单，先点击图上的标准值点(记住一定要点选上)，然后单击右键，点击“添加趋势线”。弹出趋势线类型选择对话框，有线性，对数，多项等选项，如下图：

8.在选择之前，我们先对上图做一下肉眼观察，如果那些点能连成一条直线，或接近直线，我们就选择“线性”，意思就是出来的趋势线是一条直线，相应的该直线的方程就是y=ax+b的形式。不过一般的ELISA都不会是所有的标准点呈完全的线性关系的，也就是说不是一条完全的直线，这时我们可以选择“多项式”，多项式后面还有“阶数”的选择，也就是说求出来的方程是几次方，我们一般选“2阶”，即出来的方程为y=ax2+bx+c. 选择完毕后，弹出以下窗口。

9.趋势线也就是标准曲线在此便显示出来了。接下来我们需要将公式显示出来，以根据样本的OD值计算其浓度值。在鼠标点选该线(一定要选中，选中后出现下图的样子即线由很多店标识出来)，单击鼠标右键，选择趋势线格式。我们在弹出的窗口中选择“选项”选项卡，出现下图，我们选择显示公式，显示R方，即相关系数，这时公式与R方值便都显示出来了。

我们将样本的OD值作为X代入上述方程，求出来的便为浓度值了。
一般ELISA的标准曲线的相关系数要达到0.99以上，本例中为0.9999，非常不错的曲线，这样就保证了由该曲线及其方程求出的样本浓度具有很强的可信性。