ELISA检测实验注意要点

好的试剂，出色的仪器和正确的操作是确保ELISA检测成果准确牢靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的构成不同而有所差异，国内医学查验一般均用板式点。本文将叙说板式ELISA各个操作过程的留心关键，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特别仪器合作运用，严峻遵从规矩操作，必能得出准确的成果。

可用作ELISA测定的标本非常广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均对等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝聚、缩短后即可获得。除特别状况外，在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可对等运用。

血清标本可按常规办法搜集，应留心避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会发作假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其间的可发作聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，逾越一周测定的需低温冰存。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上激烈振动。混浊或有堆积的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。重复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测，宜少量分装冰存。保存血清自搜集时就应留心无菌操作，也可参与恰当防腐剂。

按试剂盒说明书的要求预备试验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液运用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。