ELISA结果计算分析步骤详解

作为ELISA的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。

以夹心法为例。

1. ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。

2. 样本的OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。

3. 建立标准曲线

在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X轴上为标准品浓度，Y轴为对应的OD值）。推荐使用origin软件。

详细步骤如下：

第一步: 输入OD值和标准品浓度

第二步：选择拟合曲线类型

选中输入的数值框，按如下操作依次点击选项。

第三步：勾选“find specific X/Y”

完成上述操作后，点击Fit按键，拟合曲线和相关信息将自动生成（如第四步所示）

第四步：查看标准曲线信息（如参数值，R-Square等）

第五步：设置坐标轴类型为对数。

双击第四步中的拟合曲线图，对其进行编辑。双击X轴、Y轴设置坐标类型为“Log10”。


 

第六步：根据标准曲线计算样本浓度

选择第四个工作表（Fit NLF Find X from Y1），在左列输入样本的OD值，对应的浓度将在右列自动生成。

如果样本的OD值超出标准曲线的上限，请在实验前适当稀释样本以获得精确结果。在分析数据时，样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数。