PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用

在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中，有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继1995年发现庚型肝炎病毒（HGV）后，1997年日本学者Nishizawa等［1］报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒，暂时称为输血传播病毒（TTV）。1998年，Okamoto等［2］报道了TTV全序列。为了解临床病人TTV的感染状况，本文用PCR法对急慢性肝炎临床标本进行了TTV DNA的检测，同时检测HBV DNA和HCV RNA。现将结果报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本来源  613例肝炎患者血清标本均来自肝炎门诊及传染科住院病人，其中男379例，女234例，年龄19~65岁。另选择100例健康体检者作为对照组，HBsAg（-），抗HCV（-），肝功能血清指标正常，B超影像学检查正常。分离血清0.5ml置-20℃保存备用。

　　1.2  HBsAg、抗-HCV的检测  HBsAg试剂盒由上海科华公司提供，抗-HCV IgG试剂盒由河南华美生物工程有限公司提供，采用ELISA法，严格按试剂盒说明书进行操作。酶标仪为美国宝特Bio-TekELX800。

　　1.3  TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA的检测  TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA PCR试剂盒均由河南华美生物工程有限公司提供。每次PCR扩增设置阴性、阳性对照。PCR扩增仪为PE9600型。

　　2  结果

　　613例肝炎患者中TTV DNA阳性率为3.1%（19/613），HBV DNA阳性率为38.5%（236/613），HCV RNA阳性率为11.9%（73/613）。19例TTV DNA（+）中有4例合并HBV DNA（+），3例合并HCV RNA（+），没有发现三者同时阳性的病例。健康体检者检出2例TTV DNA（+），未检出HBV DNA（+）和HCV RNA（+）。HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和HBV DNA（-）、HCV RNA（-）人群TTV DNA的检出与健康体检者进行比较，差异无显著性（P>0.05）。详见表1。

　　表1  不同人群TTV DNA阳性检出情况　略

　　3  讨论

　　由于TTV为单链DNA病毒，目前多采用传统PCR或套式PCR方法来检测TTV DNA。本文采用半套式PCR方法对急慢性肝炎临床标本和健康体检者进行TTV感染的检测，结果显示236例HBV DNA（+）者中有4例发现TTV DNA（+），73例HCV RNA（+）者中有3例发现TTV DNA（+），未发现TTV DNA、HBV DNA和HCV RNA三者同时（+），提示TTV与HBV和HCV不存在相关性。


　　本文613例临床标本TTV DNA阳性率为3.1%，10例健康体检者TTV DNA阳性率为2.0%，远低于国内、外的报道［3~5］。Naoumov等［3］在72例慢性肝炎患者中检出了18例TTV DNA阳性（25.0%）。蔡澍等［4］的资料显示，TTV DNA在正常献血人群、HBsAg阳性人群和抗-HCV阳性人群中其检出率都在10%~17%。杨建荣等［5］的资料显示，TTV DNA阳性检出率在健康体检者、乙肝患者和丙肝患者分别为28.3%、31.7%和25.0%。从表1表明，HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和HBV DNA（-）HCV RNA（-）人群TTV DNA的检出与健康体检者进行比较，差异无显著性（P>0.05），结果提示，TTV的感染与HBV、HCV无明显的，其致病性与肝炎的关系可能与其他因素有关，是否在一定条件下转化成致病因素有待进一步探索。TTV在本地区是否存在变异，还有待进一步探索。这也可能与采用不同序列的PCR系统有关。Okamoto等［6］对报道的众多TTV DNA序列进行同源性比较，不同TTV基因型的某些片段序列存在很大的差异性，TTV至少可分为16个基因型，因此，采用不同序列的PCR系统可影响TTV的检出率。有关TTV的流行病学、生物学特征还有待于进一步的研究。

　　【参考文献】

　　1  Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus（TTV） associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophys Res Commun,1997,241:92-97.

　　2  Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus（TTV） associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Hepatol Res,1998,10:1-16.

　　3  Naoumov N,Petrova E,Thomas M,et al.Presence of a newly described human DNA virus （TTV）in patients with liver disease.Lancet,1998,352:191-195.

　　4  蔡澍,李国明,罗均,等.PCR和ELISA 检测不同人群TTV的感染状况.河北医药,2004,26:135-136.

　　5  杨建荣,陈晓东,陶志华.荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用.华中医学杂志,2004,28:17-18.

　　6  Okamoto H,Takahashi M,Nishizawa T,et al.Marked genomic heterogeneity and frequent mixed infection of TT virus demonstrated by PCR with primers from coding and noncoding regions.Virology,1999,259:428-43.