PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用
在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中，有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继1995年发现庚型肝炎病毒（HGV）后，1997年日本学者Nishizawa等［1］报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒，暂时称为输血传播病毒（TTV）。1998年，Okamoto等［2］报道了TTV全序列。为了解临床病人TTV的感染状况，本文用PCR法对急慢性肝炎临床标本进行了TTV DNA的检测，同时检测HBV DNA和HCV RNA。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源 613例肝炎患者血清标本均来自肝炎门诊及传染科住院病人，其中男379例，女234例，年龄19~65岁。另选择100例健康体检者作为对照组，HBsAg（-），抗HCV（-），肝功能血清指标正常，B超影像学检查正常。分离血清0.5ml置-20℃......阅读全文
Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
PCR简介/PCR仪
PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四种脱氧核苷酸）及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制
重叠PCR—overlap PCR
1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理：变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后，再进行指数扩增的PCR过程。 2、基本原理*步：PCR产生两个或者几个片段，这几个片段之间必须有重叠区。 第二步：以两个片段为例，见上图，*步产生的两个片段，A D链之间有互补，B
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
普通PCR梯度PCR 原位PCR 荧光定量PCR仪的区别
普通PCR仪： 一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪，也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如；（ABI 2720） 梯度PCR仪： 一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称
反转录PCR（RT-PCR, Reversed Transcript PCR）
1 原理 RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、ol
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
反向PCR （inverse-PCR）
利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析，探索邻接已知DNA片段的序列，并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆，建立全长的DNA探针。可用于：（1）基因游走研究；（2）转位因子研究；（3）已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。实验方法原理反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色