科学家揭示细菌对外源DNA的适应性免疫响应机制
近期，中国科学院生物物理研究所高璞课题组与美国Sloan研究所Patel课题组合作，揭示了两类新型CRISPR-Cas系统（Type V-A Cpf1及Type V-B C2c1）响应外源DNA的作用机制，相关研究论文分别发表于2016年8月的《细胞研究》（Cell Research）杂志和12月15日的《细胞》（Cell）杂志。 对外源DNA的免疫识别及应答，是细胞感知和抵御病原感染的重要手段。这一免疫应答过程广泛存在于从低等原核生物到高等哺乳动物当中。高等动物的天然免疫系统包含多种DNA模式识别受体，用于对外源侵染DNA的识别。而细菌响应噬菌体或质粒DNA则主要依赖于两套系统：“Restriction-Modification（R-M）系统”及“CRISPR-Cas系统”。高璞以往的研究主要是围绕外源DNA免疫识别这一科学问题，在博士与博士后期间分别参与了细菌R-M系统及哺乳动物胞质DNA响应通路等工作。相关研究已发表......阅读全文
外源酶的来源方式
（一）微生物产生的外源酶 微生物在食品中的生长繁殖给食品的成分和性质带来广泛而又深刻的变化，这些变化都是在微生物分泌的各种酶的作用下发生的。有些微生物分泌的各种酶可将食品中蛋白质水解成多肽和氨基酸，并能进一步将氨基酸分解生成氨、酮酸、胺、吲哚和硫化氢等物质，而引起食品的腐败变质。但是也有些微生物在食
细胞化学词汇外源基因
中文名称：外源基因英文名称：exogenous gene定 义：经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
外源基因转移技术介绍
外源基因的转移：基因转移（gene transfer）是将外源基因导入细胞内，其转移方法较多，常用的要有下列几类：1）化学法：将正常基因DNA（及其拷贝）与带电荷物质和磷酸钙、DEAE－葡萄糖或与若干脂类混合，形成沉淀的DNA微细颗粒，直接倾入培养基中与细胞接触，由于钙离子有促进DNA透过细胞有作用
外源基因转化的用途
利用外源基因转化已经产生了转基因学科，利用重组DNA技术可以将以前没有的新特性引入生物体。通过转基因创造的生物体很多，从细菌到哺乳动物，包括绵羊和猴子，它们有多种用途：用于研究发育遗传学、疾病过程和基因调控等。转基因动物可以生产药物，并增加牛奶或肉类的产量。来自转基因动物的组织和器官可以用于输血和移
外源基因的诱导表达
1．目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG（异丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤2
10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇500μg/ml 牛血清白蛋白（组分Ｖ.Sigma产品）（可用可不用）该缓训液应分装成小份，贮存于－20℃。另外，再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤1
外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂
程序外DNA合成试验
基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外，故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝细胞等不处于正在增殖
如何用双酶切鉴定外源DNA在重组质粒中的插入方向
在基因插入的邻近末端部位选择一个单酶切点( B ),在载体上选一个单酶切点( A),用这两个内切酶分别酶切两份重组质粒,正、反两个方向的插入将产生不同大小的 DNA 片段,通过凝胶电泳即可鉴定插入片段方向是否正确.
细菌胞外蛋白含量测定
Folin—酚试剂法(Lowry法)(一)实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一.过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了
外源ＤＮＡ片段未的性质
１．带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段，刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样，因而几乎总是能找到一种带有与外ＤＮＡ片段未匹配的限制切位点的载体。于是，采用所谓的定向
关于外源基因的基本介绍
将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生，也可以人为发生。人工转化转染方法包括：（a）化学方法，有磷酸钙沉淀法、DEAE -葡聚糖络合和脂质介导的DNA转化法；（b）物理方法，包括电穿孔、微注射和基因枪法；（c）重组法，比如利用病毒作为载体。 细菌、植物和动物的基因转化具有重要的研究
间充质干细胞源性胞外囊泡调节免疫功能研究
间充质干细胞（MSCs）是在机体内广泛存在的一种具有自我更新能力和多向分化潜能的组织干细胞。它不仅能够促进损伤组织的再生修复，也能够通过调控免疫细胞的增殖、分化和功能状态，调节炎症因子水平, 调节免疫功能。近年来，MSCs和各种炎症因子的互作机制得到了越来越多的关注。同时，由于MSCs被认为是产
细菌DNA提取方案
细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。3、12000转/分钟 离心10分钟
细菌DNA提取方案
细菌DNA提取方案:革兰氏阴性菌,如E.coli,一般有三种可以选择的方法. 一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板,连续画线,37摄氏度培养18－24小时.2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟.3、12000转/分钟离心10分钟
细菌DNA＝未来光盘？
英国《自然》杂志11日发表了一项生物技术重要成果：科学家利用CRISPR手段，成功将图片和视频短片编码进了细菌的DNA中，通过测序DNA再重新提取出来后仍相当准确。其证明了活细胞作为一种可靠媒介，存储一定数量的数据完全有可能。 CRISPR被称为“生物科学领域的游戏规则改变者”。最近的一些研
免疫器官的外周
外周免疫器官包括淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织（mucosa associated lymphoid tissue，MALT）等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。 淋巴结 1．淋巴结的结构淋巴结为近乎圆形的网状结构，表面有一层结缔组织被膜，略凹陷处为门，有输出淋巴管和血管出入。被膜向外延伸
细菌胞外蛋白含量测定实验
(一)实验原理这种蛋白质测定法是最ling敏的方法之一.过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度.这两种显色
外源化学物质的adme过程
简述外源化学物质的adme过程血液凝固可分为三个过程：1）凝血酶原激活物形成；2）凝血酶形成；3）纤维蛋白形成。内源性凝血途径特点：参与凝血的因子均在血浆中，启动因子是XII，当血管内膜受损或血液抽出体外后接触异物表面时被激活，再依次通过因子XI、IX的激活引起因子X激活。外源性凝血途径特点：由血管
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法l 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞1. 转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.
外源基因进入细胞主要方法介绍
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法* 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀：
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（3）
12、蛋白降解分泌表达的目标蛋白比胞内蛋白确实容易被降解。可以尝试以下几种办法：1、尽可能降低培养液的pH值减少酶活，酵母生长pH值比较广，4～7都可以试一下；2、多试几种蛋白添加剂，充当酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最适下罐（摇瓶也一样），宁可少表达点也别给降解光了。实在没办法，只好换菌株或做p
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2. 含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。用无机盐进行大规模发酵，更省钱。大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。一个批次100h左右估计3－4 瓶氧气。
什么是外源化学物的毒性
毒性与剂量、接触途径、接触期限有密切关系。评价外源化学物的毒性,不能仅以急性毒性高低来表示,有一些外源化学物的急性毒性是属于低毒或微毒,但却有致癌性,如,NaNO2;有些外源化学物的急性毒性与慢性毒性完全不同,如苯的急性毒性表现为中枢神经系统的抑制,但其慢性毒性却表现为对造血系统的严重抑制。
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。2、温度： 在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概 5-6左右。pH3的时候
外源基因的概念和功能特点
中文名称外源基因英文名称exogenous gene定 义经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
分子遗传学词汇外源基因
中文名称：外源基因英文名称：exogenous gene定 义：经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
简述外源凝集素的功能
1、有助机体Ca2+、糖输运、维系共生功能。在机体的Ca2+和糖输运中起作用。在贝类中，为它们同一些植物共生起维系作用。 2、共扼接合功能。与其他糖蛋白或糖发生共扼接合，就如高等动物中抗体与抗原体系中的相互作用。 3、清除杂物功能。在甲壳动物变态期间，参与清除机体不必要的细胞，组织片段或残余