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颠覆教科书,DNA复制方式或遭改写

美国加州大学戴维斯分校和斯隆凯特林癌症纪念中心的研究人员首次捕捉到单个DNA分子的复制过程。尽管这段11秒的视频看起来像是一款上个世纪的视频游戏,但它清楚地记录下DNA复制时散发荧光的单链由左向右延伸的过程。 此前人们一直认为,DNA聚合酶构建DNA双链的过程是相互协调以某种方式协同工作的。然而,这项新研究却有一些意外发现。有时候,一条单链会不可预测地停止延伸,而另一条单链还在持续;DNA复制的过程也会突然改变速率。这段视频表明,DNA复制的双链之间并无协调性,每条单链的合成都是完全独立的。这项研究为DNA复制的机制提供了新的见解。相关研究结果发表在6月15日的《细胞》期刊上。 DNA双螺旋是由方向相反的两条DNA单链组成的。每条单链都是由四种碱基(A、T、C和G)组成,并按照碱基互补配对原则形成DNA双链。 DNA开始复制时,解旋酶首先将DNA双链解开为两条单链。而后,引发酶将引物附着到每条单链上,令DNA复制得以进......阅读全文

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

DNA复制体结构和工作原理首次被揭示

  DNA是生命遗传信息的载体,它的复制是生命繁衍过程当中最重要的一步。关于DNA复制分子机制的研究一直是生命科学中最基本的问题之一。近日,美国国立卫生研究院杰出研究员杨薇的课题组揭示了DNA复制体的结构和工作原理,相关成果发表在《科学》上。  DNA的复制由多个蛋白组成的复制体协同完成,这些蛋白包

DNA重组(DNA recombination)技术:工具酶

一、限制性内切酶限制性内切酶(restriction endonucleases,RE)是其中最重要的工具酶之一。它是一类核酸水解酶,能识别和切割双链DNA分子中的特定核苷酸序列。(一)命名原则限制性内切酶大多从细菌中发现,根据来源进行命名,限制酶的第一个字母(大写,斜体)为宿主菌的属名,第二、第三

影响PCR的主要因素

PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作,PCR自动热循环中影响因素很多,对不同的DNA样品,PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不

DNA重组(DNA recombination)技术:DNA重组与鉴定-1

重组DNA是在体外用限制性内切酶,将不同来源的DNA分子进行特异地切割,获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接,从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞,在宿主细胞中进行无性增殖,获得大量的目的基因或DNA片段,此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在

首次亲眼见证!DNA复制与我们想象的并不同

  肺部具有造血功能、DNA 聚合酶不需要引物、小脑不仅控制平衡,这些新发现不断在改写着教科书。近日,发表在《细胞》杂志上的一项研究首次观察了单个DNA分子的复制画面。结果发现,DNA复制的随机性要比人们想象的要多得多。这一结论足以引发人们对DNA复制和其它生物学过程的重新思考。  6月15日,发表

解旋酶打开DNA双链过程破解

  美国温安洛研究所近日发布公告称,该所科学家和洛克菲勒大学合作,成功破解CMG解旋酶参与真核生物内DNA(脱氧核糖核酸)复制的结构过程,并首次观察到其与DNA间的相互作用。这项发表在美国《国家科学院学报》上的最新研究,为生命繁殖之谜提供了全新注解。  温安洛研究所教授李慧琳(音译)从酵母生物体内提

解旋酶打开DNA双链过程破解

  美国温安洛研究所近日发布公告称,该所科学家和洛克菲勒大学合作,成功破解CMG解旋酶参与真核生物内DNA(脱氧核糖核酸)复制的结构过程,并首次观察到其与DNA间的相互作用。这项发表在美国《国家科学院学报》上的最新研究,为生命繁殖之谜提供了全新注解。  温安洛研究所教授李慧琳(音译)从酵母生物体内提

北大学者发表JBC封面文章:真核细胞DNA复制起始新机制

  来自北京大学生科院的研究人员发表了题为“Sap1 is a replication-initiation factor essential for the assembly of pre-replicative complex in the fission yeast Schizosacchar

首次亲眼见证!DNA复制与我们想象的并不同

  6月15日,发表Cell杂志上题为“Independent and Stochastic Action of DNA Polymerases in the Replisome”的研究中,科学家们首次观察到了单个DNA分子的复制画面,并且获得了一些惊人的发现。研究称,DNA复制的随机性要比人们想象

颠覆性发现:DNA复制教学视频都是错的!

  脱氧核糖核酸(DNA)复制几乎是地球所有生命的基础。如今,科学家们第一次在单个DNA分子尺度观察到了它们的复制。有些令人吃惊的是,DNA复制意想不到地富有随机性。研究人员利用先进成像技术以及极大耐心,观察了大肠杆菌DNA复制,并测量了每股链上酶机器(复制复合体)的运行速度。此外,研究人员还发现单

清华大学Nature发表首发性成果

  2015年7月29日,清华大学高宁研究组和香港科技大学戴碧瓘教授研究组共同在《自然》(Nature)杂志上以长文形式在线发表了题为《真核生物DNA复制解旋酶MCM复合物的3.8埃分辨率结构》(Structure of the Eukaryotic Minichromosome Main

我国学者解析DNA复制起点识别复合物高分辨冷冻电镜结构

  在国家自然科学基金项目(项目批准号:31761163004、31725007、31630087)等资助下,北京大学生命科学学院高宁教授课题组与香港科技大学戴碧瓘教授课题组合作,解析了酿酒酵母ORC结合DNA复制起始位点3-Å分辨率的冷冻电镜结构。研究成果以 “Structure of the O

我国学者解析DNA复制起点识别复合物高分辨冷冻电镜结构

图. ORC通过弯曲DNA来进一步加载DNA复制解旋酶MCM2-7的过程模式图  在国家自然科学基金项目(项目批准号:31761163004、31725007、31630087)等资助下,北京大学生命科学学院高宁教授课题组与香港科技大学戴碧瓘教授课题组合作,解析了酿酒酵母ORC结合DNA复制起始位点

Science:DNA上的“太空漫步”

  科学家们对细菌的一种限制性内切酶进行研究,揭示了解旋酶沿DNA做长距离移动的机制,展示了这种酶对ATP能源的高效利用,相关论文刊登在了近期出版的《科学》(Science)杂志上。   解旋酶helicase是一类分布广泛的三磷酸腺苷酶(ATPase),在基因组中具有重要的功能。人类中的一些癌症

聚合酶链式反应PCR原理是什么?

PCR(聚合酶链式反应)技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合

多篇Nature论文解析出结合到DNA上起点复制复合物高清结构

  细胞通过基因组复制产生自身的拷贝而进行增殖。按理说,DNA复制是所有生命形式中最基本和最保守的机制。破解这一过程是如何最精确地实现的秘密是理解生命秘密的关键。当沃森和克里克在半个多世纪前基于DNA双螺旋结构首次提出DNA的复制方式时,许多人认为将两条DNA链分开进行复制的分子机器(即DNA复制机

染色质结构形成及DNA复制叉稳定性维持的分子机制

  100年前,研究人员发现染色体上有非常紧密的区域,并提出了异染色质结构这个概念(Montgomery TH. (1901), A study of chromosomes of the germ cells of metazoan. Trans Am Phil Soc. 20: 154-136;

建立随机重叠DNA插入文库实验

            试剂、试剂盒 乙酸铵 ATP 乙醇 甘油 蒸馏水 IPTG Mg

PCR扩增仪 历史发展

PCR这项技术是由凯利·穆利斯(Kary Mullis)发明,并因此在七年之后,1993年10月,获得了诺贝尔化学奖该项殊荣。穆利斯的想法是,利用一种人工方法,和反复相同程序的方法,并利用一种特殊的酶——即DNA聚合酶来扩增特定的DNA片段。DNA聚合酶天然存在于生物体内,在细胞分裂前进行DNA的复

入门:PCR技术概论

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一

用化学常识解释转基因

  河南日报退休高级编辑,大河健康报退休总编,河南农大兼职教授,中国新闻奖获得者。  各位女士、各位先生:  大家好。大家都是经常来图书馆借书、看书的读者,如今喜欢看书的人真是难能可贵。看年龄,大家多数是60后、50后,少数是70后、40后。大家可能都不是生物专业的大学生,但是大家在中学阶段都学过化

PCR反应体系与反应条件 冷冻离心机

PCR反应体系与反应条件  标准的PCR反应体系:        10×扩增缓冲液   10ul       4种dNTP混合物   各200umol/L       引物        各10~100pmol        模板DNA      0.1~2ug    

关于PCR你了解多少?

  实验原理  PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法,它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而体外PCR反应同样需要类似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列,实现对特

建立随机重叠DNA插入文库实验

下面的方案描述了鸟枪法测序的起始步骤,从靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌体载体构建 DNA 片段文库,也包括断裂靶 DNA 的两种方法--超声法和喷雾法,以及用 DNA 聚合酶修复片段末端的技术要点。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。试剂、

华人学者解析DNA解旋机制的起源

  驱动DNA复制的蛋白质——细胞生长和繁殖背后的动力,是地球上一些最复杂的机器。这一多步复制过程包括数以百计的光原子级运动部件,可快速地相互作用和变换。定位这些密集的分子机器,是医学和生物学领域最有前途和富有挑战性的前沿。  目前,科学家们已经查明了复制过程开始的关键步骤,其中“解压缩”和分裂DN

冷冻电镜揭示DNA复制点火机制

  在Van Andel研究所结构生物学家的带领下,一个国际科学小组揭示了DNA复制的关键步骤,为许多疾病的驱动程序提供了新见解。  “以前的研究已经描述过聚集在DNA周围的酶如何为DNA复制做准备了,在这里,我们描述的是这些酶就位时,它们会对DNA做什么,”《PNAS》文章通讯作者、表观遗传学中心

PCR技术应用进展

   PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织

PCR技术(六):PCR技术应用进展

PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术  原位PCR就是在组织细胞里进行PCR

PCR技术(一):PCR技术概论

  PCR技术概论PCR技术简史PCR技术的基本原理PCR反应体系与反应条件PCR反应特点PCR扩增产物的分析  聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自

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