WIKI资讯

献给初学者：PCR常见问题分析

我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策，还有终极解决方案。 PCR 常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。 变性温度是否准确：PCR 仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。 反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加 Taq 酶以前，将反应体系 95℃ 加热 5~10 分钟。 引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。 引物错误。利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。 DNA 凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是 DNA 凝胶和 PCR 程序......阅读全文