首个牛胚胎干细胞诞生
经过几十年的努力，科学家最终成功地从牛身上获得胚胎干（ES）细胞，并在培养皿中使其保持原始状态。获得这些可变成从皮肤到肌肉、骨头等各种组织的多功能细胞，将使调整和保存肉牛以及乳牛品种的遗传性状变得更加容易。这反过来又促成了产生更多牛奶或者更嫩牛肉、产仔时面临更少并发症以及拥有更强的疾病抵抗力的动物。此项发现或许还为研究牛的基本发育和成为人类疾病模型开辟了道路。 “我原以为这辈子都不会看到此事发生。”美国密歇根州立大学发育生物学家Jose Cibelli表示。他是上世纪90年代末试图获得牛ES细胞的团队成员之一。自从以后的诸多努力中，当来自牛胚胎的干细胞在实验室中被生长出来时，它们会发育成其他细胞类型。这意味着它们很快丧失了多能性。 1981年，科学家成功分离出小鼠ES细胞，从而使他们得以研究早期胚胎发育并且测试遗传缺陷的影响。此后不久，研究人员将目光转向了牛。不过，直到1998年，研究人员才找到合适的营养基培养人类ES细......阅读全文
多能干细胞（ES/iPS）冻存和复苏方法
多能干细胞(ES/iPS)冻存是干细胞扩增传代过程中重要的一环，但是多能干细胞不同于普通细胞系，其增殖扩增过程中需要聚团生长，为保持其细胞活性，不建议单细胞传代。而且使用血清+DMSO冻存方法，不能很好的保持细胞活性，且复苏细胞成活率较低。本文就重点介绍多能干细胞进行冻存以及解冻的标准化步骤。介绍使
日本用ES细胞制成“精子干细胞”：或解不孕难题
日本京都大学教授斋藤通纪的研究小组在6日的美国科学杂志网络版上发表一项成果：首次在老鼠试验中，由能够成为各种细胞或组织的“胚胎干细胞”（ES细胞）成功在体外制作出了成为精子基础的“精子干细胞”。 报道称，研究小组还确认从该“精子干细胞”产生了精子。据悉，该成果有助于弄清精子的形成机理，促进探明
多能干细胞（ES/iPS）冻存和复苏方法
多能干细胞(ES/iPS)冻存是干细胞扩增传代过程中重要的一环，但是多能干细胞不同于普通细胞系，其增殖扩增过程中需要聚团生长，为保持其细胞活性，不建议单细胞传代。而且使用血清+DMSO冻存方法，不能很好的保持细胞活性，且复苏细胞成活率较低。本文就重点介绍多能干细胞进行冻存以及解冻的标准化步骤。介绍使
关于胚胎干细胞的研究进展—牛ES细胞的介绍
Saito等在加有LIF的培养基中对牛ICM进行培养，分离得到牛ES细胞并进行传代。Sims等使用与一般ES细胞分离完全不同的低密度培养法，使用BRL(buffalo rat liver)条件培养基并添加亚硒酸钠、胰岛素、运铁蛋白和50 mL/L胎牛血清，培养6 d～10 d，得到15个ES细胞
关于胚胎干细胞的研究进展—羊ES细胞的介绍
Handyside等以绵羊皮肤成纤维细胞和胎儿成纤维细胞作饲养层，从7日龄～8日龄绵羊囊胚分离类ES细胞，结果得到内胚层样细胞而无ES细胞出现。Tsuchiya用免疫外科法分离8 天～9 天绵羊囊胚ICM，培养于STO细胞饲养层上，得到2个类ES细胞系，传至4代。Tillmann等用胎牛肝成纤维
关于胚胎干细胞的研究进展—兔ES细胞的介绍
Graves K H等从兔子附植前囊胚分离得到ES细胞，并进行了初步鉴定，证明它们具有在饲养层上保持未分化状态的增殖能力，体外传代培养1年以上，仍具有正常的核型，且能形成包含三胚层分化物的胚体。之后，Niemann等以PMEF为饲养层，建立了9个兔ES细胞系。Schoonjans L等将兔ES细
关于胚胎干细胞的研究进展—猪ES细胞的介绍
Piedrahita J A等采用STO、猪成纤维细胞和猪子宫上皮细胞作为饲养层，以DMEM为基础培养液，从猪囊胚ICM分离ES细胞，发现猪囊胚ICM在STO或PMEF饲养层上可以附着增殖，而在猪胎儿成纤维细胞饲养层上虽可附着但增殖甚微，传不过4代即发生死亡。Evans等将6天～7天猪囊胚直接培
关于胚胎干细胞的研究进展—水貂ES细胞的介绍
Sukoyan 等从桑椹胚、囊胚和 ICM 建立了8个水貂ES细胞系，其中4个为XX 型，4个为XY型。源于桑椹胚和ICM的ES细胞有2/3其X染色体处于激活状态，而70%～100%的源于囊胚的ES细胞其一条X染色体处于失活状态。在源于桑椹胚和ICM的ES细胞中，XX基因型细胞的G6PD（glu
关于胚胎干细胞的研究进展—大鼠ES细胞的介绍
Iannaccone P M等从大鼠PVG近交系分离克隆大鼠ES细胞系-RESC-01，该细胞系对SSEA-1和AKP呈阳性，在大鼠胎儿成纤维细胞饲养层上能很好的增殖，在体内环境能分化形成多种细胞类型。RESC-01细胞系在体外悬浮培养时形成的胚体出现有节律的收缩运动，将其注入囊胚并移植假孕母鼠
关于胚胎干细胞的研究进展—小鼠ES细胞的介绍
小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，且已广泛应用于生命科学研究的各个领域。1981年Evans首次分离得到小鼠ES细胞，他以手术切除受精后2.5 d小鼠卵巢并结合激素注射干扰子宫环境，从而使胚胎延迟着床，再回收胚胎，将其体外培养于STO细胞饲养层上，结果得到了小鼠ES细胞系。Martin G R以免
关于胚胎干细胞的研究进展—仓鼠ES细胞的介绍
Doetschman等从叙利亚金黄仓鼠（mesocricetus auratus）囊胚建立了4个ES细胞系，都具有正常的核型和44条染色体，1个为XX型，3个为XY型，它们能够在PMEF（primarymouse embryonic fibroblast）饲养层上增殖并保持未分化状态，悬浮培养时
Electroporation－of－ES－cells
Cells are routinely passaged two days prior to electroporating. Usually one 10 cm plate at approximately 80% confluency will provide enough cells for
KARYOTYPING－ES－CELLS
An actively growing culture of cells is required, i e 2 - 3 d ES cell culture. The total number of cells needs to be between 106 - 107 cells.N B Read
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Thawing－Human－ES－cells
Remove Human ES cells from liquid nitrogen storage tank. Fill out a freeze/thaw form.Thaw cryovial by gently swirling in waterbath until only a small
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Freezing－Human－ES－Cells
Collagenase cells for approximately 7 minutes at 37 °C (until edges of colonies are curling up).With a 5 ml pipet, gently pipet and scrape colonies f
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Splitting－Human－ES－cells－on－MEFs
based on splitting onto one plateWarm collagenase IV split media to 37 °C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following a
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols—Splitting－Human－ES－cells－onMatrige
based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of co
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——General－notes－on－ES－cell－culture
hES media has a two week shelf life.hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended because i
ES细胞分化培养实验——培养皿ES细胞集落
实验材料ES 细胞单一胚胎样体仪器、耗材细菌培养皿ES 分化培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：悬滴培养的 ES 细胞单一胚胎样体100 mm 细菌培养皿ES 分化培养基2. 在 100 mm 细菌培养皿中加 10 ml 预热的分化培养基。3. 从温箱中取出培养 2 天的悬滴培养物。小心翻转培养
FACS－Analysis－of－ES－Cells
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surf
Counting－ES－cell－Chromosomes
(original reference: "tissue culture made easy" by Christian LaMantia from the Magnuson lab)1) Plate cells onto gelatinized plates (35 or 60 mm) witho
Routine－Culturing－of－ES－Cells
Cell are normally passaged every 2-3 days, this is important to avoid differentiation.Signs of differentiation are:-i) colonies are surrounded by flat
ES－Cell－Culture－and－Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
关于胚胎干细胞的研究进展—灵长类和人类ES细胞的介绍
Thomson等从恒河猴囊胚分离并建立了一个ES细胞系（R278.5），并证明该细胞系持续培养一年仍能维持未分化状态和正常的XY核型，表达细胞表面抗原标记AKP、SSEA-3（stage-specific embryonic antigen-3）、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81
将基因转移至未分化ES细胞实验——ES细胞电穿孔
实验材料线性化转移基因 DNA未分化 ES 细胞仪器、耗材电穿孔仪和电穿孔杯neoR-MEF 滋养板ES 生长培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：线性化转移基因 DNA（1 mg/ml，溶于无菌 TE）未分化 ES 细胞Bio-Rad 电穿孔仪和电穿孔杯100 mm neoR-MEF 滋养板ES
Screen－ES－cells－by－Southern－Blot
Digest DNA in 96-well plateTo each well add:4ul 10Xbuffer4ul Enzyme0.4ul Spermidine(0.4M)31.6ul H2O37‡C 19h, then add 4ul loading dye to each well. Lo
ES－and－TS－cell－freezing/thawing
实验概要ES and TS cell freezing/thawing.主要试剂ES cell freezing medium (2x) 2x ES cell freezing medium should be made up fresh each time it is to be
ES－and－TS－cell－freezing/thawing
Needed:ES cell freezing medium (2x)2x ES cell freezing medium should be made up fresh each time it is to be used, and should comprise freshly prepared
ES细胞打靶技术介绍
你听说过喀迈拉兽（chimera）吗？没错，就是古希腊神话故事中一只会喷火的怪兽，这种怪兽拥有狮头、羊身、蛇尾，像是由几种动物拼成的。或许你知道喀迈拉兽，但你是否知道在生物遗传学中也有一种名为喀迈拉的动物吗？那这神奇的怪兽与我们生物领域中的ES细胞基因打靶到底有什么关系呢？本期话题，咱们就一起来聊聊
ES细胞分化培养实验
实验材料单一胚胎样体仪器、耗材组织培养板巴斯德吸管玻璃盖玻片无菌镊子ES 分化培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：培养悬液中的单一胚胎样体6 孔组织培养板带棉塞巴斯德吸管明胶包被的玻璃盖玻片无菌镊子ES 分化培养基2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明