原位PCR仪
用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪,如病源基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增,不但可以检测到靶DNA,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值。......阅读全文
原位PCR的优势和不足
PCR虽然能扩增包括福尔马林固定、石蜡包埋组织的各种标本的DNA,但扩增的DNA或RNA产物不能在组织细胞中定位,因而不能直接与特定的组织细胞特征相联系,这是该技术一个局限性。原位杂交虽具有良好的定位能力,但由于其敏感性问题,尤其是在石蜡切片中,尚不能检测出低含量的DNA或RNA序列。而原位PC
原位PCR实验的大致过程
大致过程 实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等。其基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞,蛋白酶消化处理组织;在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增,覆盖并加液体石蜡后,在原位PCR仪上进行PCR循环扩增,PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交,最后显微镜观察结果。 实验玻片
怎样设定原位PCR对照实验
设立阳性对照,即用已知阳性细胞或组织切片做阳性标志,实验结果应呈阳性,表明实验方法准确可靠。同时要设立阴性对照,即用已知阴性细胞或组织切片作阴性对照,实验结果应呈阴性,表示实验方法无假阳性结果;也可以用实验细胞或组织切片,不加标记的dUTP(直接法),PCR结果显示阴性,或不加引物或不加TaqD
原位免疫PCR的IHC增敏方法
(一)基本原理 Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检
逆转录酶原位-PCR-实验
实验方法原理 原位 PCR 仪,盖玻片,培养箱,湿盒,RT-PCR 试剂盒,Permount 实验材料 组织样品和细胞培养物
逆转录酶原位-PCR-实验
实验方法原理 原位 PCR 仪,盖玻片,培养箱,湿盒,RT-PCR 试剂盒,Permount实验材料 组织样品和细胞培养物试剂、试剂盒 Nuclear Fast Red甲醛缓冲液检测溶液DEPC 处理的水PBSKH2P04二甲苯乙醇牛血清白蛋白SSC NBT BCIP 显色剂胃蛋白酶DNA
原位PCR技术的定义和方法介绍
1.概述:原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR是Hasse等于1990年建立的,实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等.2.其基本方法为
逆转录酶原位-PCR-实验
这一部分介绍了一种原位 PCR,特别是逆转录酶原位 PCR 的简略方法。详细讨论了其中的每个实验程序。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验方法原理原位 PCR 仪,盖玻片,培养箱,湿盒,RT-PCR 试剂盒,Permount实验材料组织样品和细胞培养物试剂、试剂盒Nuc
原位聚合酶链式反应(in-situ-PCR)和原位反转录
一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程(一)原位PCR步骤1、预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒精脱水,
原位杂交仪—原位杂交试验(一)
收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然后换成甲醇,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)
原位杂交仪原位杂交的意义
原位杂交:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DNA或R
原位杂交仪—原位杂交实验(二)
原位杂交第二天 1. 1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。 2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。 3)置换2XSSCT1ml,60℃,放置15分钟。 4)置换0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
原位杂交仪—原位杂交实验(三)
原位杂交第三天 1) 用1ml含10%热灭活血清的MABT溶液置换抗体溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlMABT置换,25分钟,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,最后用1mlMABT溶液置换,25分钟。 2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
实验材料 样品试剂、试剂盒 双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪器、耗材 加湿盒热循环仪实验步骤 1. 将载有固定样品的载玻片置105℃加热块上5~120 s。 2. 载玻片放入含0.3%H2O2中,于37℃或室温温育过夜,以灭活内源性过氧化物酶活性,然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。实验材料样品试剂、试剂盒双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪
原位聚合酶链式反应(in-situ-PCR)和原位反转录聚合酶...
原位聚合酶链式反应(in situ PCR)和原位反转录聚合酶链式反应原位聚合酶链式反应(in situ PCR)和原位反转录聚合酶链式反应(in situ RT-PCR)操作规程 (一)、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤
原位划痕仪基本试验
材料去除机理的研究对精密超精密制造具有重要意义。通过安装在扫描电子显微镜内的原位划痕试验装置,可以研究残留切屑对块体金属玻璃材料去除过程的影响。在刮擦过程中整个BMG的去除过程可以实时观测。动态观察立方隅角压头前刀面上片状切屑的形成和生长情况。实验结果表明,当大量切屑堆积在压头的前刀面上,阻碍物料向
原位力学测试仪
~原位力学测试仪 材料微观力学性能原位测试仪器具有:微观、原位、复合载荷。多物理场耦合四大特点。其中复合载荷、多物理场耦合特点在传统宏观力学测试仪中有应用、微观、原位是不同于传统宏观力学测试仪的特点。1、微观测试宏观测试:传统力学测试,针对的都是宏材尺度试件微观测试:微纳米级纳米尺度下对试件材
PCR简介/PCR仪
PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制
原位杂交仪—荧光原位杂交相关解释
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule
原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用2
在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子水平,使细胞内众
原位免疫PCR的IHC增敏方法原理和操作流程
(一)基本原理Sano等(1992)率先利用基因工程的方法表达了A蛋白与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功,建立了免疫PCR技术。这是一种新的抗原检测系统,利用细胞工程和基因工程技术,巧妙地将抗原抗体反应的特异性同PCR的敏感性相结合,通过构建单克隆抗体与重组核酸的嵌合体分子,使得利用PCR技术检测蛋白
原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用2
在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子
原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用2
标本的制备原位PCR技术可应用于细胞悬液、细胞涂片、冰冻切片以及石蜡切片。相比较而言,以悬浮的完整细胞做原位PCR效果最好,石蜡切片效果最差。随着技术方面的一些问题被解决,近年也有从石蜡切片中得到满意的PCR效率的报道。效果不好的原因是多方面的,如:玻片上做PCR,热传导较差,热对流不均匀,TaqD
高温原位纳米压痕仪服务
优势 1、InForce 50驱动器,压头可加热,用于电容位移测量,并配有电磁启动的可互换探头; 2、样品可升温至800°C,采用10mm样品尺寸和真空兼容的样品安装系统; 3、样品直径13-14mm,厚2mm 左右,上下表面水平,高度抛光; 4、InQuest高速控制器电子设备,具有1
原位杂交仪的应用
①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究; ②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测; ③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测; ④基因在染色体上的定位; ⑤检测染色
PCR仪
简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定
原位杂交仪有哪些特点
◆ 全触摸屏操作,友好的人际操作界面; ◆ 提供中/英文操作菜单选择; ◆ 具有断电恢复功能,使用过程出现断电情况,在来电后设备可按原设定程序自动恢复运行; ◆ 支持运行结束后自动降温功能; ◆ 支持自动预热功能; ◆ 平台控温精度高,温度波动小; ◆ 可以支持105个自定义程序储存
原位X射线粉末衍射仪
主要指标:功率50KV*40mA最小步长 0.0001测量角度范围1-120仪器角度分辨率+/-0.0001功能及应用范围:X射线衍射仪可对样品进行结构参数分析,如物相定性与定量分析,衍射谱的指标化及点阵参数测定,晶粒尺寸及点阵畸变测定,粉末衍射图谱拟合修正晶体结,结构分析,结晶度测定,此外还可进行
全自动原位杂交仪简介
NAI7000原位杂交技术以来的30年内,该技术在各个领域得到了广泛应用。但在大部分的研究工作中,杂交信号都是用光学显微镜进行观察并记录的,这样在分辨率上就存在很大的限制,为了对检测的特异核酸进行更精确的亚细胞定位,以便将组织、细胞和染色体等水平上DNA或RNA定位与超微结构相互联系起来,许多学