逆转录PCR的实验
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml9、试管架：5ml、1.5ml、20μl10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水11、铝制饭盒：4个12、塑料小饭盒：1个13、大瓷缸：2个14、锡泊纸：一卷15、卷纸：2卷16、三角烧瓶：带盖，稍大二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，......阅读全文
PCR－from－Tissue
collect piece of tissue (e.g., pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOHput in boiling H2O for 30 sec (optimum may ne
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
PCR技术盘点
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性，模板DNA与引物的退火(复性)，引物的延伸。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小
REVERSE－TRANSCRIPTION－PCR:
REVERSE TRANSCRIPTION PCR:RNA -> LOTS OF DNAContentsReverse Transcription ReactionPolymerase Chain ReactionReverse Transcription Reaction:This provide
双重PCR实验
随着转基因农作物的大量种植，其安全性问题也日益受到人们的重视。2002年我国要求对转基因农作物实行标签管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-E
Colony－PCR－Protocol
1. Pull out eight glycerol stock plates from the –80oC freezer and set on bench top to thaw. Be sure to remove the foil seal before leaving the plates
PCR基因扩增
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃
长距离PCR
在标准 PCR 反应条件下，PCR 扩增 DNA 片段的长度一般为 1~2 kb，这种扩增能力对许许多多常规的 DNA 分子操作技术要求来说是已经足够了（如 DNA 序列分析和基因突变等)，但是对于扩增某些大的完整的哺乳动物基因组基因，这种 PCR 扩增能力还是远未达到实验要求的。本实验来源「分子克
PCR实验操作
PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 （universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括S
PCR使用技巧
基本PCR引物设计参数 引物设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。特异性是指发生错误引发的频率。特异性不好或劣等的引物会产生额外无关和不想要的PCR扩增子，在EB染色的琼脂糖凝胶上可见到；引物效率是指在每一PCR循环中一对引物扩增的产物与理论上成倍增长量的接近程度。 ①引物长度；
梯度PCR仪
把一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度），通常有12种温度梯度，这样的仪器就叫梯度PCR仪。因为被扩增的不同DNA片段，其最适退火温度是不同的，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增，就可以筛选出表达量高的最适退火温度，进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
pcr的原理
PCR技术的基本原理：该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱
PCR实用大全
PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。二、引物长度一般在15~30碱基之间。引
Complete－PCR－Guide
In the polymerase chain reaction (PCR), a thermostable DNA polymerase amplifies DNA that is flanked by known sequences. The known sequences correspond
Streptomyces:Protocols/PCR
Description Polymerase Chain Reaction (PCR) is a method of amplifying a specific DNA target sequence. The cycle involves denaturing the template doubl
荧光PCR原理
1．荧光染料荧光基团通常各自拥有单一的光吸收峰。在光的刺激下，荧光基团吸收光的能量后通常以三种方式释放出能量：1) 光能 许多荧光基团吸收光能后仍旧以光能形式释放能量，并且发射光的峰值大于吸收峰。比如荧光染料Fam的光吸收峰为490nm，而发射峰为530nm。 2) 热能 某些荧光基团吸收光能后，能
PCR检测方法
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染
PCR的特点
可靠性高，抗干扰能力强PLC用软件代替大量的中间继电器和时间继电器，仅剩下与输入和输出有关的少量硬件，接线可减少到继电器控制系统的1/10~1/100，因触点接触不良造成的故障大为减少。高可靠性是电气控制设备的关键性能。PLC由于采用现代大规模集成电路技术，采用严格的生产工艺制造，内部电路采取了先进
PCR产物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的ZL权。TA克隆方法（Original TA Cl
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
PCR－from－Tissue
1.collect piece of tissue (e.g., pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH 2.put in boiling H2O for 30 sec (optimum
PCR技术概论
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一
PCR常见术语
PCR常见术语1.矩阵形式代表什么？矩阵形式就是体外包装的cDNA文库以二维矩阵的形式进行排列组合，用于筛选特定的基因和片段。2．SM是什么意思？SM是“悬浮培养液”的缩写。3．Ct 值的定义在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值
PCR的原理
PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合
PCR仪Biometra
德国 Biometra公司于1985年成立，1989年第一个推出三槽PCR仪，并极具创意地用Peltier元件控制升降温过程。事实证明，Biometra的选择是正确的，因而成就了其在PCR仪领域的主导地位。Biometra的T系列PCR仪由Tpersonal、T1、Tgradient、T300
传统定量PCR
1．传统定量PCR方法简介 1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为
PCR－组装反应
试剂、试剂盒氯化镁Rockstart 缓冲液three-reaction 主混合液琼脂糖凝胶仪器、耗材PCR 仪PCR 管实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯化镁,35 mmol/LRockstart 缓冲液（http://klentaq.com)three-reaction 主混合液82ul
PCR反应程序
1．常规程序将PCR反应所需的成分配置完后，在PCR仪上于94-96℃预加热几十秒至几分钟，使模板DNA充分变性，然后进入扩增循环。在每一个循环中，先于94℃保持30秒钟使模板变性，然后将温度降到复性温度（一般50-60℃之间），一般保持30秒钟，使引物与模板充分退火；在72℃保持1分钟（扩增1kb
定量PCR简介
PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤，使目标DNA片段曾指数扩增。因此，PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统，能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平，从而限制了它在临床检测中的应用。荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号