用寡聚（dT）作引物合成放射性标记的扣除cDNA探针
本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交，继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA，制备扣除 cDNA 探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交，继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA，制备扣除 cDNA 探针。实验材料反转录酶反转录酶缓冲液驱动方 mRNA模板 mRNA试剂、试剂盒乙酸铵DTTEDTA乙醇HCl异丁醇NaOH酚氯仿胎盘 RNA 酶抑制剂SDSSDS EDTA 溶液磷酸盐缓冲液SPS 缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材沸水浴冰水浴矿物油Sephadex G-50 柱微量离心管水浴或加热板实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液乙酸铵（10 mol/L)DTT (1 mol/L)EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)乙醇HCl ( 2.5 mol/L)异丁醇NaOH ( 3 mol/L)酚：氯仿（1:1，V/V）胎盘 RNA 酶抑制......阅读全文
RNA探针的简介
许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP,则可合成RNA探针。RNA探针一般都是单链,它具有单链DNA探针的优
荧光探针有毒吗
有毒的。在紫外-可见-近红外区有特征荧光，并且其荧光性质可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。
探针和引物区别
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被
分子杂交基因探针的类型介绍
分子杂交基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液 SDS SSC Blocking 溶液 经过剪切的鲑鱼精 DNA探针
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液SDSSSCBlocking 溶液经过剪切的鲑鱼精 DNA探针仪器、耗材 沸水浴杂交炉实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂高严格性洗涤缓冲液（0.2XSSC，5 g/LSDS），预热到 68°C(可选，见第 9 步）低严格性洗涤缓冲液（2XSSC，5 g/LSDS)，预
国际知名生物芯片技术公司及其研发重点
现在全世界已有几十家公司专门从事芯片的研究和开发工作，而且已有较为成型的产品和设备问世。其中，基因芯片的商业化开发相对成熟，美国的Affymetrix公司是世界上最有影响的基因芯片开发制造商。目前Affymetrix公司已开发全套的生物芯片技术相关产品，包括* 研究应用系列芯片及相关试剂和试
消减杂交的概念和意义
消减杂交(subtractive hybridization,扣除杂交) 是指利用不同组织、细胞或不同状态下组织、细胞基因表达的差异性，并结合核酸杂交建立的克隆差异表达基因的技术。是差别杂交的改进，用过量的参照细胞的mRNA 或CDNA 与目的细胞的CDNA 或mRNA (目的序列) 杂交，形成的R
椰子死亡类病毒的检验方法
电泳检测应用双向电泳法可有效地检测此种类病毒。第一向电泳是利用分子量的不同将类病毒与寄主核酸分开，第二向电泳是在变性条件下把类病毒的环状和线状分子分开（环状分子比线状分子跑得慢），从而确定有无类病毒。银染色技术的应用，将电泳检测灵敏度提高到放射性同位素标记方法的水平。分子杂交一类是RNA探针，即利用
核酸分子杂交法介绍
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检测。 所谓
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别
荧光原位杂交探针和荧光探针有什么区别 荧光原位杂交技术问世于70年代后期，其曾多用于染色体异常的研究，近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多，特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现，使FISH技术不仅在细胞遗传学方面，而且还广泛应用于肿瘤学研究，如基因诊断基因定位等 。原
四探针－四探针测试仪－薄膜电阻测定仪
1．SZT-2A 主机采用的先进电路设计，所测数值更精、更快、更准（一代为传统式电路，缺点：体积大，速度慢，元器件繁多导致影响机器寿命）。2．屏幕采用液晶显示（一代为只有数码管显示）。3．匹配电脑接口及软件，让操作简便明了化（可直接连接电脑，电脑进行自动运算根据输入指定厚度，自动比照并修正系数，使被
表达谱基因芯片实验
表达谱基因芯片可应用于：（1）疾病诊断；（2）新药开发；（3）环境保护。实验方法原理按照预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在一定条件下，载体上的核酸分子可以与来自样品的序列互补的核酸片段杂交。如果把样品中的核酸片段进行标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检测到杂交信号
实质等同性（转录组学）实验
实验材料:小麦 试剂、试剂盒:β-巯基乙醇 氯仿
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！ 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！
核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成
转录图谱的原理
所有生物性状和疾病都是由结构或功能蛋白质决定的，而已知的所有蛋白质都是由mRNA编码的，这样可以把mRNA通过反转录酶合成cDNA或称作EST的部分的cDNA片段，也可根据mRNA的信息人工合成cDNA或cDNA片段，然后，再用这种稳定的cDNA或EST作为“探针”进行分子杂交，鉴别出与转录有关的基
目的基因的获取4
4、cDNA文库的大小 一个cDNA文库要包含99%的mRNA时所需要的克隆数目。 p: 文库包含了完整mRNA的概率（99%） 1/n: 某一种低丰度（不足14份拷贝）mRNA占细胞整个mRNA的比例 N：所需的重组载体数（克隆数） (三)基因组文库与c
基因诊断的原理（一）
核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸序列作出探针，与变性后的单链基因组D
实质等同性（转录组学）实验（四）
3.9 芯片数据介绍对简单的实质等同性实验来说，一个比较转基因系与对照之间基因表达的散点图就已足够了。文献 [ 5 ] 中参与两个实验的样品都标注在图15. 2中。结果用 GeneSpring 软件包显示，绘制了每组比较小麦系之间每个基因成对的平均强度，并突出显示少数感兴趣的基因（统计上显著
实质等同性（转录组学）实验2
3.9 芯片数据介绍对简单的实质等同性实验来说，一个比较转基因系与对照之间基因表达的散点图就已足够了。文献 [ 5 ] 中参与两个实验的样品都标注在图15. 2中。结果用 GeneSpring 软件包显示，绘制了每组比较小麦系之间每个基因成对的平均强度，并突出显示少数感兴趣的基因（统计上显著差异表达
常用的分子生物学基本技术1
DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分
用经典－RACE－扩増－3末端－cDNA－实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 二硫苏糖醇 TE 反转录缓冲液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptⅡ逆转录酶
PCR扩增CDNA库中的特异序列策略
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异D
cDNA文库组标准流程六:电转化流程
1．电转化感受态细胞的制备1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中
功能基因cDNA3#39;末端的克隆
一．原理(1) 以目的mRNA 为模板，使用Oligo dT-3sites Adaptor Primer 进行反转录反应，合成1st Strand cDNA。(2) 使用含有KpnI、XbaI、BamH I 酶切位点的上游特异性引物和3sites Adaptor Primer进行PCR反应。(3)
用PCR扩增cDNA库中的特异序列
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特
用－cDNA－芯片分析人类基因表达实验
实验材料 母板试剂、试剂盒 细菌细胞中的标记LB 培养基氨苄青霉素乙醇Super 肉汤培养基 甘油96孔碱裂液T low E 缓冲液10 X PCR 缓冲液 20 X SSC琥拍酸酐仪器、耗材 96深孔板和V 形塑料细胞培养皿水平微量培养板离心96孔多位点复制针1 加仑储存袋多微孔的带层带孔的振荡器
用经典－RACE－扩増－3末端－cDNA－实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液二硫苏糖醇TE反转录缓冲液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆转录酶poly(A)+RNA 或总 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶仪器、耗材 水浴或加热仪热循环仪实验步骤 试剂可以从多数大供应商那里买到该过程所需要的材料与合适的