噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
通过用 32P 标记探针的原位杂交，可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜，这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的，能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过用 32P 标记探针的原位杂交，可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜，这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的，能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。实验材料噬菌体 DNA放射性标记探针试剂、试剂盒氯仿预杂交液SMSSPE仪器、耗材煮沸的水浴玻璃（Pyrex ) 烘烤平皿或其他杂交器皿胶水培养箱放射性墨Whatman 3 MM 纸实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿预杂交液SM2X SSPE洗液 1（2X SSC，0.1% (m/V) SDS）洗液 2（1X SSC，0.1% (m/V) SDS）洗液 3（0.1X SSC，0.1% (m/V) ......阅读全文
M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备
感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
实验方法原理 一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法，在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法，包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。
λ噬菌体DNA提取试剂制备、操作步骤和注意事项
λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径：其一是裂解生长，环状DNA 分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体D
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理 λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
实验方法原理λDNA是线状双链DNA,EcoRⅠ在其上有5个切点,产生6个片段,通过琼脂糖凝胶电泳可将这几条片段分离开。如何重建这6个片段呢?可用两种限制性内切酶同时或先后作用于λDNA。例如λDNA经EcoRⅠ切割后在凝胶上分离开来的6条带可洗脱出来,然后分别将这6条片段用HindⅢ切割。结果表明
细胞系的多位点DNA指纹检测——经标记的－M13－噬菌体－DNA制备
实验方法原理用随机引物延伸法标记 M13mp9 DNA [ Finberg and Voglstein，1983 ]，并用葡聚糖柱（Sephadex） 纯化。实验材料模板HEPESDTM试剂氧核苷酸牛血清蛋白P-dGTPKlenow 酶试剂、试剂盒DTM试剂OL试剂标记缓冲液洗柱缓冲液仪器、耗材Se
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA结合活性的分析方法
实验概要本实验从含有源自文库筛选的噬菌体克隆制备了噬菌体上清液，通过噬菌体ELISA，评估筛选出DNA/RNA结合区域的特异性序列的结合活性。实验步骤1. 噬菌体的制备 1) 挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 乙醇 氯化钠 苯酚 醋酸钠 TE 琼脂糖凝胶 原始的重组 M13 噬菌体
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。实验材料 限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 EDTA乙醇甲酰胺NaClTETris-Cl仪器、耗材 琼脂糖凝胶硼硅酸盐巴斯德吸管实验步骤 一、材料1.
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。 实验材料
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要，其次可用于检测纯化过程，以找到出问题步骤。
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶基因组 DNAλ 噬菌体包装混合物λ 噬菌体臂 DNA试剂、试剂盒 ATPSM 和 SM+ 明胶仪器、耗材
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。 实验材料 限
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液乙醇氯化钠苯酚醋酸钠TE琼脂糖凝胶原始的重组 M13 噬菌体单链 DNAYT 培养基仪器、耗材 Corex 离心机管巴斯德滴管柱层析树脂大肠杆菌菌株 CJ236大肠杆菌菌株 TG1JM109 或相当的菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液各种贮存液，缓冲液和试剂成分请参阅附录 1。
含尿嘧啶的单链噬菌体－M13－DNA－制备实验
经典的 Kunfcel 寡核苷酸指导的诱变方法利用大肠杆菌中的尿嘧啶 DNA 糖基化酶 (glycosylase) 特异地筛除去含尿嘧啶碱基的 DNA 的选择性作用（请参考寡核苷酸诱变信息栏）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA结合活性的分析方法
A.噬菌体的制备 1．挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15ug/ml的四环素的2×TY培养基。用一个微孔培养展示野生型DNA/RNA结合区域的噬菌体，作为阳性对照。以250r/min的速度小心振荡微孔板，30℃
λ噬菌体的局限性λ噬菌体
实验方法原理 本实验以含原λ噬菌体和缺陷噬菌体λdg的双重溶原菌gal+作为供体,经紫外线诱导后,获取能转导半乳糖发酵基因的高频转导噬菌体裂解液,然后让这些转导噬菌体将gal+基因转移到受体菌gal-中去。实验材料 供体菌 : Escherichia coli K12 F2 gal + (带有原噬菌
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
实验方法原理 置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶λ
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 如本方案所述，λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说，λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。实验材料 噬菌体重组子大肠杆菌试剂、试剂盒 氯仿乙醇高盐缓冲液Tris-ClNaClEDT
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理置换型载体
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液 甲酰胺上样缓冲液 测序酶稀释缓冲
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
实验方法原理 置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央填充片段的两端以相反方向排列（Frischaufet al. 1983）
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
如本方案所述，λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说，λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理如本方案所述，λ 噬菌体 DNA 可很容易地
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 如本方案所述，λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说，λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。
可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA制备实验
在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时（如 EMBL 系列、λ2001、λDASH、λZAP、λgt10），这种方案才是可行的。因为在这种情况下，不必采取步骤来减少非重组噬菌体的形成。本实验来
单链和双链M13噬菌体DNA的大规模制备
实验方法原理 这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA，因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体，以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA，如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时。实验材料 大肠杆菌 F' 菌株M13 噬菌体原液
可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备...
实验方法原理 在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时（如 EMBL 系列、λ2001、λDASH、λZAP、λgt10），这种方案才是可行的。因为在这种情况下，不必采取步骤来减少非重组
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析，通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物，并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌体 SP6、T3 和 T7 编码的依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶来完成）的模板以及 PCR 的模板。本