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试剂、试剂盒AE 缓冲液。 苯酚10%SDS酚氯仿 无水乙醇乙醇. 3mol L 乙酸钠无 RNase 的水仪器、耗材髙速离心机实验步骤一 材料与设备1)AE 缓冲液：50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡）。3)10%SDS4) 酚：氯仿（1:1)。5) 氯仿6) 无水乙醇及 80% 乙醇.7)3mol/L 乙酸钠8) 无 RNase 的水9) 髙速离心机。二 操作方法1) 离心收集 l0 ml 酵母细胞培养物，用 40ulAE 缓冲液重悬。转移到 1.5 ml 离心管中。2) 加入 40ul10%SDS，混匀，再加入等体积 (440u1) 苯酚，涡旋混匀。3)65°C 温育 4mim, 干冰/乙醇浴迅速冷却直至出现苯酚结晶，最大转速离心 2 min,. 上清转移到一新管中。4）加入等体积酚：氯仿抽提，离心 5 min, 上清转移到新管中，加入 0.1 倍体......阅读全文
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。基因
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因
实验方法原理 前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体，它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成，每一种 snRNP 由一个 snRNA 和
【注意事项】基因组DNA分子量大，所有操作必须轻柔，酚/氯仿对皮肤有腐蚀作用，应该戴手套操作。二、RNA的制备【实验目的】1.理解生物细胞中RNA制备方法的原理。2.熟悉组织细胞中RNA制备的基本操作。（一）细胞总RNA的提取1.异硫氰酸胍法【实验原理】异硫氰酸胍法提取细胞总RNA是目前常用的提取方
前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体，它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成，每一种 snRNP 由一个 snRNA 和几种蛋白质构成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋
（一）实验程序如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180℃干烤８小时或更
柯萨奇病毒(Coxsackie viruses简称Cox.病毒)是1948年Dalldorf等采用新生小鼠研究脊髓灰质炎病毒时，在纽约附近的Coxsackie分离发现的一种肠道病毒，属小RNA病毒科，可分为A、B二组.A组有23型(A1-22，24)，B组有6型(B1-6)，与A组的A9型有共同
芯片实验操作流程包括样本DNA或RNA制备、标记、杂交及洗涤等步骤基因芯片实验操作流程图 1．样本DNA或RNA制备 芯片实验中核酸的抽提没有特殊之处，参照常规的分子生物学实验手册
实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA 时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合
细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotein，DNP），RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。其中真核生物的DNA又有染色体DNA
第一节 核酸分离与纯化的设计与原则细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白（nucleoprotein）。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白（deoxyribonucleoprotei
实验原理： 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA 时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品
材料与方法 细胞培养于标准条件下进行肿瘤细胞系（ACHN、Caki、SJSA、PANC-1、MDA-MB231、AsPC-1、SK-MES、NCI-H322M、22RV1）培养。使用TWEAK或 Anti-TWEAK（RO5458640）分别对细胞进行处理。于不同时间点收集肿瘤细胞系（
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
一、实验目的（1）了解制备RNA几种方法的原理及优缺点（2）掌握稀碱法提取兔肝RNA的原理和操作技术二、实验原理 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，
来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。因此，RNA制备的意义有两个方面 * 获得特定细胞来源的cDNA文库，克隆目的基因 * 分析基因的表达，阐明基因调控的特性，了解从基因转录产生RNA的结构，数量，水平及
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法，
随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展，新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力，已创建不少快速、简便、特
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文
RNAse的无处不在导致了RNA的脆弱敏感。要改善RNA提取的质量，专家为你介绍在RNA纯化过程中要特别注意的10个问题。 在收获组织及细胞死亡之后，应立即灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀
1.在收获组织及细胞死亡之后，应立即灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活3）立即将样品置
在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题，实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我为什么总是提他们？因为还是很佩服的哦，生怕自己说错了，被他们指出来哦）都谈到了很多，鄙人也充大头答了一些问题，但是还是有各种问题，由于的基因表达还有点实战经验（但也技止此而），所以想些点东西给大家参考，计
相关专题制备RNA探针在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检