免疫沉淀实验——抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原

实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS仪器、耗材离心机摇床实验步骤1. 按基本方案进行,但以下说明的操作步骤已经修改: (2a)按每毫升加入2 μl 正常血清的量对放射性标记抗原进行预澄清处理,加入适量的抗血清,于4℃放置12~18 h, 111 000 g 离心10 min,保留上清。 (4a)加入1 μl 抗原特异性抗血清,3 μg 抗原持异性纯化单抗,或抗原特异性杂交瘤培养上清(克隆细胞系来源的加30 μl 或未克隆细胞系来源的加100 μl),用漩涡混合器混匀,于4℃放置2 h。然后加入合适量的抗血清,旋涡混合器混匀后,于4℃放置12~18 h。 (5a)按基本方案洗涤免疫沉淀物,但以1 000 g 离心7 min。 (6a)加入20~50 μl SDS样品缓冲液,不要旋起,否则免疫沉淀物会粘在液面上的管壁。 盖紧盖子,对免疫沉淀物、先在56℃保温1 h,然后在100℃保温5......阅读全文

免疫学实验抗胰岛素受体抗体介绍

抗胰岛素受体抗体介绍:  抗胰岛素受体抗体(IRA)是Flier等于1975年在研究合并黑色棘皮症的胰岛素抵抗综合征病人时发现的。此抗体可与存在于机体细胞膜上的胰岛素受体结合,而表现为对胰岛素的亲和性降低。检测IRA时常用传代人淋巴细胞IM-9(胞质膜上受体丰富,细胞易于获得)或人胎盘制备胰岛素受体

临床化学检查方法介绍抗胰岛素受体抗体介绍

抗胰岛素受体抗体介绍:  抗胰岛素受体抗体(IRA)是Flier等于1975年在研究合并黑色棘皮症的胰岛素抵抗综合征病人时发现的。此抗体可与存在于机体细胞膜上的胰岛素受体结合,而表现为对胰岛素的亲和性降低。检测IRA时常用传代人淋巴细胞IM-9(胞质膜上受体丰富,细胞易于获得)或人胎盘制备胰岛素受体

临床化学检查方法介绍抗透明带抗体介绍

抗透明带抗体介绍:  透明带(zona pellucida,ZP)是围绕在卵细胞周围的一圈无结构、嗜酸性的明胶样物质,由卵细胞及其外围的卵泡细胞于卵的生长发育过程中共同分泌而成,是由4条多肽链通过二硫键结合的糖蛋白,具有很强的免疫原性,ZP能诱发机体产生全身或局部的细胞与体液免疫反应,产生抗透明带抗

免疫学实验抗透明带抗体介绍

抗透明带抗体介绍:  透明带(zona pellucida,ZP)是围绕在卵细胞周围的一圈无结构、嗜酸性的明胶样物质,由卵细胞及其外围的卵泡细胞于卵的生长发育过程中共同分泌而成,是由4条多肽链通过二硫键结合的糖蛋白,具有很强的免疫原性,ZP能诱发机体产生全身或局部的细胞与体液免疫反应,产生抗透明带抗

免疫资料——免疫学常用简称介绍

1:抗体查询常用名词Reactivity (物种与抗体反应):Species with which the antibody reactsHost Species (宿主):Host in which the antibody was generatedApplications(应用) :Speci

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点及应用2

3. 染色质免疫沉淀Input对照:在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做Input对照。Input是断裂后的基因组DNA,需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联,DNA 纯化,以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果,还可以根据Input中的靶序

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点及应用1

序言随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能,可以通过对蛋白活性(激活或抑制其活性),蛋白数量(过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout), 以及蛋白功能(功能缺陷

Active-Motif的染色质免疫沉淀试剂盒(ChIP)

ChIP(染色质免疫沉淀)方法是研究活体“蛋白质-DNA”相互反应的一种非常强大的工具。目前,这种方法用于染色质结构的动力学研究、转录因子的调节和辅助调节因子及其他表观遗传变化的研究。ChIP的使用过程分为三个主要步骤:第一步,在甲醛固定后分离和破碎染色质;第二步,使用感兴趣的蛋白的抗体完成特定染色

免疫固定电泳和游离轻链定量

诊断M蛋白病多需要进行以下三种检查:血清蛋白电泳(Serum protein electrophoresis, SPEP):通过电泳分离血清蛋白,能发现血液中的M蛋白并量化。若SPEP阳性,需用免疫固定电泳确证。血清免疫固定电泳(Serum immunofixation):利用直接识别重链和轻链的抗

抗原与免疫血清的制备实验

将抗原注射于动物体,可刺激动物的 B 淋巴细胞转化为浆细胞而产生特异性抗体,待动物血清中累积大量抗体时,采集其血液,分离析出血清,此即含抗体的免疫血清,或称抗血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定,传染病的诊断与治疗,抗原分析,免疫球蛋白的鉴定及其他蛋白质的鉴定与研究均有很大的用途。

抗原和免疫血清的制备实验

实验材料 家兔试剂、试剂盒 普通培养基甲醛盐水石灰酸盐水生理盐水仪器、耗材 标准比浊管离心机实验步骤 1. 抗原的制备:标准菌株的选择:所用的菌种伤寒杆菌H901和伤寒杆菌O901应具有典型形态菌落及生化反应。在生理盐水中不发生自身凝集,与特异血清有高度凝集者可作为菌种。2. 菌液的制备(1)原液制

抗原与免疫血清的制备实验

将抗原注射于动物体,可刺激动物的 B 淋巴细胞转化为浆细胞而产生特异性抗体,待动物血清中累积大量抗体时,采集其血液,分离析出血清,此即含抗体的免疫血清,或称抗血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定,传染病的诊断与治疗,抗原分析,免疫球蛋白的鉴定及其他蛋白质的鉴定与研究均有很大的用途。实

关于抗SSB抗体检测的基本原理介绍

  直接对抗RNA~多聚酶Ⅲ附属蛋白的抗体称抗SSB,是抗可提取性核抗原(ENA)的一个成分。检测方法:①免疫沉淀法,抗原为胸腺提取物;②免疫印迹法,测定在相对分子质量为48000的段;③ELISA法:抗原为亲和层析法提取的抗原或基因工程产的抗原。

植物染色质免疫沉淀试剂盒的使用说明

EpiQuik™植物染色质免疫沉淀试剂盒包括全套的试剂,允许试验者有效地在体内研究蛋白-DNA相互关系。整个过程可以在6小时内完成,产品效果远远优于任何竞争对手的试剂盒。EpiQuik™植物染色质免疫沉淀试剂盒适用于将特异性免疫沉淀与定性和定量PCR、ChIP-Seq、ChIP-on-chip结合使

关于染色质免疫沉淀法—沉淀分析的基本介绍

  沉淀分析是基于体内分析发展起来的方法,它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。它能真实、完整地反映结

抗原和免疫血清的制备实验——抗菌血清的制备

抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。实验材料家兔试剂、试剂盒普通培养基甲醛盐水石灰酸盐水生理盐水仪

elisa试剂盒的四大发展

 elisa实验可用于测定抗原,也可用于测定抗体。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。上海elisa试剂盒有这四大发展之处: 1. 免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2. 研究抗酶抗体的合成。 3. 显现微量的免疫沉淀反应。 4. 定量检测体液中抗原或抗体成

ELISA试剂盒洗板的两种方法

ELISA试剂盒洗板方法有以下两点 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需要,重复此过程数次。2.  自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。待检

关于免疫固定电泳技术的概述

  免疫固定电泳技术是一种区带电泳与免疫沉淀反应相结合的技术。基本原理是待测蛋白质在凝胶介质上经电泳分离后,将抗血清加上己分离的蛋白质泳道上或将已加抗血清的滤纸贴于其上。经孵育后,在适当位置产 生抗原抗体复合物并沉淀下来。  固定后的电泳凝胶在洗脱液中漂洗除去未结合的蛋白质,仅保留抗原抗体复合物,经

血清Ig定量的临床意义临床检验

血清Ig定量的临床意义: 1.低Ig血症有先天性和获得性二类。先天性低Ig血症,主要见于体液免疫缺陷和联合免疫缺陷病。一种情况是Ig全缺,如Buuton型无Ig血症,血中IgG<Ig/L,IgA与IgM含量也明显减低为正常人的1%;另一种情况是三种Ig中缺一或二种,最多见的是缺乏IgA,患者易

概述elisa试剂盒的应用领域

  ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之

多克隆抗体的制备步骤

多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:1、制备抗原。2、选择实验动物。3、动物免疫。4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。6、纯化出抗体。7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。具体操作与制备原理参见中国免疫学实验网。(一)抗原制备Ig 是免疫球蛋白,对异种动

关于多克隆抗体的抗体制备介绍

  多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:  1、制备抗原。  2、选择实验动物。  3、动物免疫。  4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。  5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。  6、纯化出抗体。  7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。  具体操作与制备原理参见中国免疫学实验网。  (

免疫学实验血管性假血友病因子介绍

血管性假血友病因子介绍:  用因子Ⅷ相关抗原(ⅧR∶Ag)单种抗血清与琼脂混合制成薄板,加入一定量的受检血浆(抗原),通电后,在电声作用下形成特异的火箭样免疫沉淀峰,此峰的高度与抗原浓度成正比。血管性假血友病因子正常值:      79%-117%。血管性假血友病因子临床意义:  (1)VWF∶Ag

临床化学检查方法介绍血管性假血友病因子介绍

血管性假血友病因子介绍:  用因子Ⅷ相关抗原(ⅧR∶Ag)单种抗血清与琼脂混合制成薄板,加入一定量的受检血浆(抗原),通电后,在电声作用下形成特异的火箭样免疫沉淀峰,此峰的高度与抗原浓度成正比。血管性假血友病因子正常值:      79%-117%。血管性假血友病因子临床意义:  (1)VWF∶Ag

ELISA试剂盒的使用成果

ELISA试剂盒在比色时应先以蒸馏水校零点,测读底物孔(未经任何反响仅加底物液的孔)和空白孔(以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔),以记载本次实验的试剂状况。这以后可用空白孔以蒸馏水校零点,以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度,然后进行计算ELISA试剂盒法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应

ELISA试剂盒的应用领域

ELISA试剂盒法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA试剂盒法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由

免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用

免疫比浊技术是在免疫沉淀反应(Precipitation)检测法的基础上建立的。 最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。     1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向(辐射状)免疫扩散技术。     Laurell等196

免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用

 免疫比浊技术是在免疫沉淀反应(Precipitation)检测法的基础上建立的。最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。  1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向(辐射状)免疫扩散技术。  Laurell等1966年建立了电免疫扩散

免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用

免疫比浊技术是在免疫沉淀反应(Precipitation)检测法的基础上建立的。最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。  1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向(辐射状)免疫扩散技术。  Laurell等1966年建立了电免疫扩散法