反相高效液相色谱4
方案4 用 RP-HPLC 对固相合成的多肽进行纯化实验实验材料用于分析的肽或蛋白试剂、试剂盒丙酮乙腈（HPLC级）2 -丙醇乙醇硝酸钠硫酸钠硫脲三氟乙酸仪器、耗材分析型 HPLC 装置离心机锥形瓶玻璃容器Hamilton 玻璃注射器氮气冷冻干燥机流动相过滤装置氦气制备型 HPLC 装置实验步骤一、流动相的配制1.分别配制 1L 的洗脱液 A(弱流动相）和洗脱液 B(强流动相）。例如：洗脱液 A 为 0.1%TFA 水溶液洗脱液 B 为含 0.09%TFA 的 60% 乙腈水溶液要点：用于蛋白质测序的 TFA，因其含有抗氧化剂而不适用于 RPHPLC 样品的洗脱。有机溶剂和水必须分别用两个量筒来测量，然后再混匀，因为混合时体积将会减小，最多可减少 3 〇 ml/L 总体积（由溶剂的特性决定）。如果没有按正确方法配液，将会导致流动相成分比例的偏差。实验提示：在用水和有机溶剂洗脱时，为补偿梯度洗脱中基线的变化 (因为在短波长下，大多......阅读全文
反相高效液相色谱柱的主要作用和物理性质说明
反相高效液相色谱柱由于其分离效率高、选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等特点成为广大分析工作者的优选分析方法。流动相承担液相分离作用的重要作用，是液相色谱柱系统的大脑。能否选择合适的流动相，影响整个分析工作的质量。掌握流动相选择的理论知识对于分析工作者特别是药物分析工作者是非常必要的
高效液相色谱流动相选择
流动相选择1）由强到弱：一般先用90％的乙腈（或甲醇）／水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。2）三倍规则：每减少10％的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约增加３倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察
高效液相色谱流动相选择
流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 流动相选择 1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况
液相色谱的分类和高效液相色谱用途
制备型加压液相色谱，按照色谱柱和样品量的大小，分为：（1）低压液相色谱；（2）中压液相色谱；（3）高压液相色谱；（4）快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠，没有统一、明确的标准。 1、快速色谱 柱压通常为2bar（或30psi）左右，对于那些容易分离的简单混
色谱技术方法高效液相色谱
高效液相色谱 （HPLC）是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，
高效液相色谱的色谱柱
填料和流动相的组分应按各品种项下的规定，常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。在用
高效液相色谱串联质谱和高效液相色谱质谱法的区别
两个的区别是质谱部分不同，串联质谱的质谱部分是多级的，而后者是一级的。
分析型高效液相色谱和制备型高效液相色谱的区别
是的,两者有关也没关,制备液相一般是中药用的,差别在于精密度和载样量上,普通液相接上制备柱就是制备液相
高效液相色谱串联质谱和高效液相色谱质谱法的区别
两个的区别是质谱部分不同，串联质谱的质谱部分是多级的，而后者是一级的。
反相液相色谱柱原理及运用维护
反相液相色谱柱是根据溶质、极性活动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱形式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在液相色谱中这是运用面较广的一种别离形式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，活动相多选用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶
高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用
高效液相色谱的类型
1．吸附色谱法(Absorption Chromatography)2．分配色谱法(Partition Chromatography)3．离子色谱法(Ion Chromatography)4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)5．键合相色谱法（b
高效液相色谱的优势
高效液相色谱（High Pe-rformance Liauid Chromatography，HPLC）的主要优点是：⑴分辩率高于其它色谱法；⑵速度快，十几分钟到几十分钟可完成；⑶重复性高；⑷高效相色谱柱可反复使用；⑸自动化操作，分析精确度高。根据分离过程中溶质分子与固定相相互作用的差别，高效液相色
高效液相色谱故障排除
注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。 色谱柱的维护 1．使用预柱保护分析柱（
高效排阻液相色谱
实验材料 nrhTNF 试剂、试剂盒 氯化钠 PB 仪器、耗材
高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用
高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用
高效液相色谱的应用
高效液相色谱仪是用来检测分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物。HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点。因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪
高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用
高效排阻液相色谱
高效排阻液相色谱又叫体积排阻色谱（ SEC），分子筛色谱，凝胶过滤等，生化界常用凝胶过滤。SEC是一种纯粹按照溶质分子在流动相溶剂中的体积大小分离的色谱法，填料具有一定范围的孔尺寸，大分子进不去而先流出色谱柱，小分子后流出。用于生物大分子分离的传统SEC填料主要是多糖聚合物软胶，只能在低压下作慢速分
高效液相色谱知识（一）
一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。色谱法
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的流速，一般是毫升/分钟。一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流动相，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固
高效液相色谱的应用
关于高效液相色谱的应用回答如下：一、分离混合物高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。通过与试样预处理技术相配合，高效液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度，可分离并同
高效液相色谱定性方法
与气相色谱相比，高效液相色谱定性的难度更大。HPLC过程中影响待测组分迁移的因素较多，同一组分在不同色谱条件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作条件下，同一组分在不同色谱柱上的保留值也可能有很大差别。因此，在高效液相色谱分析过程中，对定性分析方法提出了更高的要求。 （1）利用检测器的选择性进
变性高效液相色谱技术
变性高效液相色谱 (denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)是一项在单链构象多态性 (SSCP)和变性梯度凝胶电泳 (DGGE)基础上发展起来的新的杂合双链突变检测技术，可自动检测单碱基替代及小片段核苷酸的插入或缺失。DHPL
高效液相色谱怎么分析
计算含量的方法很多：面积归一化法,外标法,内标法常用的：面积归一化法那很简单,配制一个供试品,进样分析.一个色谱峰代表一个物质,最大的那个通常是你的主峰,其余的基本都是杂质.杂质（%）=杂质的峰面积/主峰峰面积*100%（这个数值在你的分析报告中应该可以看到）如果是外标法或者内标法,你需要有对照品.
高效液相色谱故障排除
注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。 色谱柱的维护 1．使用预柱保护分析
高效液相色谱串联质谱法
动物源性食品等不同基质中糖皮质激素类药物的检测方法主要采用液相色谱法（HPLC）、液质联用法（LC-MS 或LC-MS/MS）和气质联用法（GC-MS）。实验方法原理糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，具有调节糖、脂肪和蛋白质的生物合成和代谢的作用，还具有抗炎作用，称其为“糖皮质激素”是因为
高效液相色谱知识（二）
正相色谱法 采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。反相色谱法 一般用非极性固定相（如C18、C8
高效液相色谱故障排除
注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。色谱柱的维护1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性