固相pH梯度等电聚焦实验——等电聚焦

试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液实验步骤打开循环水浴,设置冷却温度,一般为 10℃。将制好的固相 pH 梯度凝胶铺在冷却板上,注意正负极。其间涂以液体石蜡或煤油,避免气泡陷入,以保证胶板和冷却板之间的良好接触。用合适的电极溶液(参见表 7.7) 润湿滤纸电极条,分别放置凝胶的酸、碱侧。有的仪器采用粗电极与凝胶直接接触,不需加电极条。按冷却板上的格子和预先设计的实验计划将样品加在凝胶上。微量样品可直接滴加,稀样品加在滤纸块上或小槽中。固相 pH 梯度等电聚焦与载体两性电解质等电聚焦的样品处理方法相似,只是前者 pH 梯度已在凝胶中固定,所以样品中的盐对梯度影响不大,但过高的盐浓度也会造成凝胶电导的降低而烧胶或使谱带畸变。将白金电极丝分别放在滤纸电极条的中心,再将阳极和阴极分别与电源的正、负极相连。接通电源,电参数参见表 7.8。展开......阅读全文

等电点聚焦分离蛋白质实验

等电点聚焦             实验方法原理 等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两性

等电点聚焦分离蛋白质实验

实验方法原理 等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两性的,因此它们的电荷由周围的载体缓冲液决定。当蛋白质或多肽处于电场中,它移动到一个区域,这里周围的 pH 等于其等电点(pI)。在包被的毛细管柱内可

等电点聚焦分离蛋白质实验

蛋白质可以在包被或非包被的毛细管柱分离,分离方案的选择取决于靶蛋白的特异属性。最重要的属性就是pl,这由一般的凝胶电泳或CE决定。等电点聚焦分离是CE分离的一种。实验方法原理等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两

等电聚焦电泳的技术特点

是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中,当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷,向负极移动;若其处在高于其本身等电点的环境中,则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置,形成一个个清晰的区带,分辨率极高。

等电点聚焦电泳的定义

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

等电聚焦凝胶电泳原理

等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在电场中移

载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪特点

载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性或非线性的pH梯度中进行分离,具有以下特点:一、优点:1、分辨率高,区带清晰、窄。2、加样部位自由,重现性好。3、可测定蛋白和多肽的等电点。二、缺点:1、载体两性电解质合成过程复杂,影响蛋白质点

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的形成

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质具有不同等电点的特性,以聚丙烯酰胺为电泳支持物,在其中加入载体两性电解质(一种含有各种连续pI的小分子混合物)的电泳分离技术。载体两性电解质是一系列多氨基多羧基的混合物,pI = 3~11。在制备聚丙烯酰胺凝胶时,将其混溶其中。载体两性电解质在溶液中的行为可从

载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪介绍

载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性或非线性的pH梯度中进行分离。一、载体两性电解质的概念:载体两性电解质是两性的,使它们在电泳柱中能达到一个平衡位置。载体两性电解质可以作为载体。两性电解质不能用于等电聚焦,只有载体两性电解质,即

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦(Isoelectric focusing,简称 IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点             实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个

等电点聚焦电泳的技术介绍

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

等电点聚焦电泳的技术介绍

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

毛细管等电聚焦的概念

中文名称毛细管等电聚焦英文名称capillary isoelectric focusing;CIEF定  义在毛细管内进行的等电聚焦。毛细管内壁经涂层处理使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内产生pH梯度,样品的各成分在毛细管中迁移至各自的等

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

什么是等电聚焦电泳技术?

等电聚焦(IEF)是利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术,特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分,在区带电泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等。

等电聚焦电泳(IEF)分离蛋白及测定蛋白质等电点

一、原理等电点聚焦(IEF)是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展,等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质,当加上电场后,由于两性载体移动的结果,在两极间逐步建立稳定的pH梯度,当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时,这种

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

等电聚焦和二维凝胶电泳实验             试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在

等电聚焦电泳的基本原理

  在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极,pH值逐渐增大。如前所述,蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征,这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动,直至某一pH位点时失去电荷而停止移动,此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点(pl)。同理,位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

            实验方法原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的p

等电聚焦(isoelectric-focusing,IEF)电泳技术

等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极

等电聚焦电泳与普通电泳区别

两者的原理上的区别:等电聚焦是根据被分离的蛋白质组分间的等电点的差异被分离,具有不同等电点的蛋白质会停留在相应的pH区带,而普通的SDS-PAGE凝胶电泳是根据蛋白质组分间的分子量大小差异进行分离的,分子量不同的蛋白质会停留在相应孔径的凝胶层。

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

蛋白等电聚焦凝胶电泳技术可应用于:(1)蛋白质的分离提纯;(2)蛋白质组学研究。实验方法原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,

等电聚焦电泳色谱仪的特点

等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。等电聚焦是在电泳介质中放入载体两性电解质,当通以直流电时,载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上,聚焦于一个狭窄区带中的过程。一、进行等电聚

关于等电聚焦水平板电泳法的固色和染色介绍

  (1)等电聚焦水平板电泳法的试剂:  a、固定液 20%三氯醋酸  b、染色液(i)染色储备液 称取1.0gG-250,溶于20ml水中,为溶液1;称取125g(NH4)2SO4,溶于400ml水中,为溶液2;称取20g H3PO4,为溶液3;将溶液3加入到溶液1中,待G-250完全溶解后 ,与