目的基因在真核系统的表达及细胞内的定位实验—荧光法
实验方法原理绿色荧光蛋白（Green fluorecent protein，GFP）最早是在海洋生物水母（Aequorea victoria）中发现的。GFP 蛋白的多肽链中含有特殊的生色团结构，可在紫外光源下发出稳定的绿色荧光，而且这种荧光发射无需外加辅助因子或进行任何特殊处理。GFP 标记分子最常作为标记物来追踪结合分子的表达水平和定位，或作为检测环境变化或蛋白相互作用的指标。目前广泛用于分子和细胞生物学各个领域。实验材料真核细胞仪器、耗材倒置荧光显微镜实验步骤取转染后24-72 hrs的细胞，置于倒置荧光显微镜下观察含有目的基因的EGFP融合蛋白的亚细胞定位。注意事项GFP处于低PH值环境中可能失去荧光效应。......阅读全文
哺乳动物细胞真核表达系统为科学研究提供助力
哺乳动物细胞真核表达系统是哺乳动物细胞经过翻译和再加工后产生的外源蛋白，在活性上远优于原核表达系统和酵母、昆虫细胞等真核表达系统，更接近天然蛋白。哺乳动物细胞表达系统可以提供较接近自然状态的重组人蛋白的翻译后修饰。在蛋白质表达过程中，会形成接近天然蛋白质的蛋白质折叠和聚合，具有活性蛋白质所必需的
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）2
在双链 DNA 分子中，只有一条链转录成 mRNA，这条链称为有意义链(sense strand)，该基因的另一条链则称反意义链(antisense strand)。在含有许多基因的 DNA 双链中，每个基因的有意义链并不是在同一条 DNA 链上。也就是说，一条链上既具有某些基因的有意义链，
胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够
真核生物基因表达的dna水平调控包括什么方式
1、转录起始水平。这一环节是调控的最主要环节，由对基因转录活性的调控来完成，包括基因的空间结构、折叠状态、DNA上的调控序列、与调控因子的相互作用等。a.活化染色质：在真核生物体内，RNApol与启动子的结合受染色质结构的限制，需通过染色质重塑来活化转录。常态下，组蛋白可使DNA链形成核小体结构而抑
细胞内定位的相关介绍
in vivo的蛋白质研究常常专注于蛋白质在细胞中的合成和定位。虽然已经知道许多细胞内蛋白质是在细胞质中合成，而膜结合蛋白质或分泌性蛋白质是在内质网中合成，但蛋白质定位到特定细胞器或细胞结构的特异性是如何达到的，目前还不清楚。一些有助于获得特定蛋白质在细胞中定位的方法得到了发展，特别是用基因工
上海生科院解析真核生物基因表达调控的新机制
2月29日，Nature Plants 杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心何跃辉课题组（植物环境表观遗传学实验室）题为Coupling of histone methylation and RNA processing by the nuclear mRNA Cap
真核生物基因表达调控发生在哪些水平上
真核生物基因表达的调控远比原核生物复杂，可以发生在DNA水平、转录水平、转录后的修饰、翻译水平和翻译后的修饰等多种不同层次（真核生物基因表达中可能的调控环节）。但是，最经济、最主要的调控环节仍然是在转录水平上。DNA水平上的调控是通过改变基因组中有关基因的数量、结构顺序和活性而控制基因的表达。这一类
真核mRNA的降解
真核细胞的翻译和mRNA衰变之间存在着平衡。正在被翻译的mRNA被核糖体，真核起始因子eIF-4E和eIF-4G以及poly（A）结合蛋白结合，不能接触外泌体复合物，mRNA得到保护。mRNA的poly（A）尾巴被特异性外切核酸酶缩短，该核酸外切酶通过RNA上的顺式调节序列和反式作用RNA结合蛋白的
真核转染
一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而
关于真核生物的基因调控—真核基因的转录分类介绍
几乎所有的真核生物的 mRNA都有一个5′帽端，但并不是所有基因的mRNA都有3′多聚A尾部，也不是所有基因的mRNA都必须经过拼接。根据这后两种加工过程的有无和复杂程度，可将真核基因的转录单位分为两大类型：一类是简单的只编码产生一种蛋白质的基因，另一类是复杂的编码两种或更多种蛋白质的转录单位。
核糖体的细胞内定位
核糖体的功能就是将mRNA上的遗传密码（核苷酸顺序）翻译成多肽链上的氨基酸顺序。因此，它是肽链的装配机，即细胞内蛋白质合成的场所，细胞合成的蛋白质可分为两类：外输性蛋白和内源性蛋白。1.外输性蛋白：主要在固着核糖体上合成，分泌到细胞外发挥作用，如抗体蛋白、蛋白类激素、酶原、唾液等，也能合成部分自身结
几种蛋白表达系统优缺点分析
蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。 1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性
几种蛋白表达系统优缺点分析
蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表
关于蛋白表达系统—昆虫表达系统的介绍
昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统，它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状病毒表达系统是国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体，可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加
原核表达实验前分析设计
表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR 、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然
真核生物的作用简介
真核生物（具有细胞核的细胞，例如植物、真菌和动物细胞）具有包含在细胞核中的多个大的线性染色体。每个染色体都有一个着丝粒，一个或两个从着丝点突出的臂。此外，大多数真核生物还有小的环状线粒体染色体，一些真核生物也有额外的小环状或线性细胞质染色体。 在真核生物的核染色体中，未浓缩的DNA以半有序结构存
原始真核生物的定义
中文名称原始真核生物英文名称urkaryote;urcaryote定 义韦斯(C.R.Woese)和福克斯(G.E.Fox)于 1977年提出，指尚未获得线粒体、叶绿体等细胞器的原始真核细胞。应用学科遗传学（一级学科），进化遗传学（二级学科）
真核mRNA的降解过程
真核细胞的翻译和mRNA衰变之间存在着平衡。正在被翻译的mRNA被核糖体，真核起始因子eIF-4E和eIF-4G以及poly（A）结合蛋白结合，不能接触外泌体复合物，mRNA得到保护。mRNA的poly（A）尾巴被特异性外切核酸酶缩短，该核酸外切酶通过RNA上的顺式调节序列和反式作用RNA结合蛋白的
真核生物的转录终止
真核生物的转录终止，是和这类转录后修饰密切相关的。真核mRNA3’端在转录后发生修饰，加上多聚腺苷酸(polyA)的尾巴结构。大多数真核生物基因末端有一段AATAAA共同序列，再下游还有一段富含GT序列，这些序列称为转录终止的修饰点。真核RNA转录终止点在越过修饰点延伸很长序列之后，在特异的内切核酸
真核起始因子的介绍
真核起始因子（英文：eukaryotic initiation factor，简称为eIF），又称为真核翻译起始因子，是指参与真核翻译起始这一过程的蛋白质。与原核起始因子只有三种（IF1、IF2、IF3）相比，真核起始因子种类多且复杂，已鉴定的真核起始因子共有12种。通过这些真核起始因子之间以及
真核生物的特点及与原核细胞的区别
真核生物（eukaryotes）由真核细胞构成的生物。包括原生生物界、真菌界、植物界和动物界。真核生物是所有单细胞或多细胞的、其细胞具有细胞核的生物的总称，它包括所有动物、植物、真菌和其他具有由膜包裹着的复杂亚细胞结构的生物。 真核生物与原核生物的根本性区别是前者的细胞内有以核膜为边界的细胞核，因此
真核生物特征
原核细胞功能上与线粒体相当的结构是质膜和由质膜内褶形成的结构，但后者既没有自己特有的基因组，也没有自己特有的合成系统。真核生物的植物含有叶绿体，它们亦为双层膜所包裹，也有自己特有的基因组和合成系统。与光合磷酸化相关的电子传递系统位于由叶绿体的内膜内褶形成的片层上 。原核生物中的蓝细菌和光合细菌，虽然
脑立体定位仪实验目的和原理介绍
一、实验目的: 1. 了解脑立体定位技术。 2. 掌握脑立体定位仪及脑图谱的使用方法。 二、实验原理: 脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中，成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用某些颅骨外面的标志（如前囟、
我国科学家解析真核生物基因表达调控新机制
中科院上海植物逆境生物学研究中心何跃辉课题组发现，染色质修饰与mRNA转录起始及加工有着相互依存关系，两者协同作用，以提高成熟mRNA及基因表达的水平。相关成果2月29日在线发表于《自然—植物学》杂志。 据了解，mRNA前体的转录起始在表观遗传学水平上受到多种转录因子以及染色质修饰与重塑的调控
绿色荧光蛋白(GFP)标记亚细胞定位
一、原理利用绿色荧光蛋白(GFP)来示踪胞内蛋白的技术。利用GFP融合蛋白技术来进行活细胞定位研究是目前较为通行的一种方法，在光镜水平进行研究，不需要制样，没有非特异性标记的影响。并且GFP的分子量为27kD，经激光扫描共聚集显微镜激光照射后，可产生一种绿色荧光，从而对蛋白质进行精确定位。激光扫描共
原核表达实验原理、材料与实验方案及注意事项
一、原理1、 E . coli 表达系统E . coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E.coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。2、 外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外
原核和真核生物mRNA不同的特点
①原核生物mRNA常以多顺反子（见）的形式存在，即一条mRNA链编码几种功能相关联的蛋白质。真核生物mRNA一般以单顺反子的形式存在，即一种mRNA只编码一种蛋白质。 ②原核生物mRNA的转录与翻译一般是偶联的，即转录尚未完毕，蛋白质的转译合成就已开始真核生物转录的mRNA前体则需经后加工，加
亚细胞定位的免疫荧光法介绍
1、直接法 将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。 2、间接法 如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应
原核表达
基因克隆技术 实验方法原理 一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测
原核表达
将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择