培养细胞的染色实验——Feulgen染色法

实验方法原理此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60 ℃用1 N HCl酸解离脱氧核糖核酸,使嘌呤碱基与糖苷犍破坏,嘌呤碱脱掉,脱氧核糖的中的醛基游离;醛基能与Schiff试剂相结合,形成一种紫色的复合物。本方法中酸的离解根重要,若温度过低、或酸度不够,醛基暴露不充分,染色会过浅;反之,酸解过分,能导致DNA完全解聚,而染色体的染色反应减弱。细胞中RNA对酸比较稳定,醛基难游离,不被着色,为DNA特异性染色的原因。试剂、试剂盒HClSchiff亚硫酸钠品红仪器、耗材棕色瓶实验步骤1. 单层盖片法培养细胞,Carnoy或醋酸/甲醇固定20 分钟;2. 投入1 N HCl 1~2 分钟(室温);3. 投入1 N HCl 8~10 分钟(60 ℃);4. 投入Schiff剂中染色1~5 小时(10 ℃暗处);5. 漂......阅读全文

蛋白质凝胶染色法实验3

糖蛋白的检测1. 通用糖蛋白检测糖 基 化 是 真 核 细 胞 中 最 常 见 的 蛋 白 质 翻 译 后 修 饰 。寡 糖 通 常 连 接 于 天 冬 酰 胺 侧 链(iV-连 接 糖 基 化 ) 或 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 羟 基 侧 链 (〇 连 接 糖 基 化)。凝 胶 中 蛋 白 质

蛋白质凝胶染色法实验(四)

(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸进行简单的凝胶脱色。利用基于微波炉的方案可以加快染色过程的进行。 SYPRO R uby 蛋白质凝胶染料具有相对较高的消光系数和量子产率,因此它十分亮眼, 化学稳定性和光稳定性都很高。光谱的激发可借助紫外线或是蓝光光源;

黑素细胞的Dopa染色法鉴定方法介绍

  黑色素的合成是以酪氨酸为底物,在酪氨酸酶的作用下,经过羟化变成多巴,进而氧化成多巴醌,进一步变成黑色素。MC中存在特异性的酪氨酸酶,细胞培养时加入外源性左旋多巴,会在酪氨酸酶的作用下合成较多的色素颗粒使细胞在镜下呈现黑色。

各种组织特殊染色法—纤维素染色法

纤维素又称纤维蛋白,在正常的情况下,它是血液内的纤维蛋白原分子聚合而形成的一种特殊蛋白质。正常的组织是见不到纤维素的。但是,当组织受损,血管内皮受到了较为严重的损害,血管通透性随之升高,则可导致大量纤维蛋白的漏出。纤维素性炎症就是以纤维素渗出为主[6]的一种抗损害的症状。在HE感染时于镜下可见到大量

培养细胞染色体显示法实验——传代培养细胞染色体显示法

实验方法原理培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料细胞试剂、试剂盒HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤1.  培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;2.  加

流式细胞仪检测细胞凋亡实验Annexin-V/PI双染色法

实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A

流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Annexin-V/PI双染色法

流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于:(1)鉴定细胞凋亡形态;(2)准确的进行凋亡细胞的计数;(3)进行特异的定性分析和定量分析。实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种

流式细胞仪检测细胞凋亡实验Heochst-33342/PI双染色法

实验方法原理流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”,因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高,Hoechst 33342在凋亡细

流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Heochst-33342/PI双染色法

实验方法原理流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”,因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞。活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用。Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比正常细胞中要高,Hoechst 33342在凋亡细

原代贴壁细胞吉姆萨染色法

原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备:1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油;2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合,研磨至无颗粒;3. 将剩余的甘油倒入研钵,于56℃保温2h;4. 加入33ml纯甲醇混匀,即为吉姆萨母液,将其保存于棕色试剂瓶内;5. 取9份pH6.80—7.38的Sorense

原代贴壁细胞吉姆萨染色法

原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备:1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油;2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合,研磨至无颗粒;3. 将剩余的甘油倒入研钵,于56℃保温2h;4. 加入33ml纯甲醇混匀,即为吉姆萨母液,将其保存于棕色试剂瓶内;5. 取9份pH6.80—7.38的Soreen缓

瑞氏染色法的染色原理

染色原理物理吸附与化学亲和作用嗜酸性物质→伊红+ Hb、嗜酸性颗粒嗜碱性物质→亚甲蓝+ 细胞核蛋白、L及B胞质

细菌染色标本的抗酸染色法

  抗酸染色也可将细菌分为两大类:即抗酸性细菌和非抗酸性细菌。因为临床上绝大多数病原菌为非抗酸性细菌,所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检查项目,只针对性用于结核病、麻风病等的细菌检查。疑似结核分枝杆菌感染的标本,经抗酸染色后以油镜检查,即可作出初步鉴定。将有肺结核症状病人的痰标本,制成涂片后,作萋

细胞骨架观察实验——鬼笔环肽显示微丝蛋白染色法

实验材料细胞试剂、试剂盒PBS三硝基甲苯甘油仪器、耗材显微镜实验步骤1.  盖片培养细胞(70 %~80 %汇合),PBS洗3 次;2.  2 %的甲醛/PBS 液(甲醛按37 %)固定3 分钟;3.  0.5 %的三硝基甲苯/PBS处理3 次,每次10 分钟;4.  PBS漂洗3 次;5.  用罗

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料细胞实验步骤1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,离心

体外培养细胞的染色体标本制备实验

实验材料 细胞实验步骤 1. 体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24h,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液,终浓度为0.3μg/ml培养液; 2. 继续培养3h; 3. 胰酶消化收集细胞至离心管; 4. 离心1000转/min,离心10min,去上清; 5. Hanks液洗,

姐妹染色单体分化染色法

1. 实验原理 姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处理技术。1973年Latt在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromode Oxyurdine,BrdU),用Hoechst 3

瑞氏染色法:染色原理

 既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态

瑞氏染色法染色原理

瑞氏染色法染色原理:    为了观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变化,血涂片必须进行染色。瑞氏染色法是血细胞分析最经典和最常用的染色法。瑞氏染料:    是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。染色原理:   是染料透入被染物并存留其内部的一种过程,此过程既有物理的吸附作用,又有化学的

微生物的染色与形态结构观察实验——鞭毛染色法

实验方法原理鞭毛是细菌的运动“器官”,一般细菌的鞭毛都非常纤细,其直径为0.01~0.02 μm,在普通光学显微镜的分辨力限度以外,故需要用特殊的鞭毛染色法,才能看到。鞭毛染色是借媒染剂和染色剂的沉淀作用,使染料堆积在鞭毛上,以加粗鞭毛的直径,同时使鞭毛着色,在普通光学显微镜下能够看到。实验材料苏云

微生物的染色与形态结构观察实验——荚膜染色法

实验方法原理荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易被染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄,易变形,因此,制片时一般不用热固定。实验材料圆褐固氮菌试剂、试剂盒荚膜染色液纯甲实验步骤1.  在载玻片一端滴一滴无菌水,取少许培养了

微生物的染色与形态结构观察实验——革兰氏染色法

实验方法原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法(Gramstain)不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对于

血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)的介绍

  (1)血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)的原理:中性粒细胞碱性磷酸酶在pH 9.6左右环境中,能水解磷酸萘酚钠底物释放出萘酚,后者与重氮染料偶联,可形成不溶性的有色沉淀(红色颗粒),定位于细胞酶活性所在处。  (2)血细胞化学染色的染色法—中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜 的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据

影响革兰染色法实验结果的因素分析

  1 操作因素  1.1 涂片太厚 在涂片时细菌挑的太多,没法分开,在脱色时就不能将第一步染上的结晶紫的颜色脱去,可能会使革兰阴性菌也出现紫色,误认为革兰阳性菌。  1.2 脱色时间  阳性菌透性小,不易被脱色,阴性菌透性大,易脱色;但这是在固定的时间条件下的结果,如果延长脱色时间,也会使脱色剂渗

细菌的荚膜染色法

一、目的要求学习并掌握荚膜染色法 二、基本原理 荚膜是包围在细菌  细胞外的一层粘液状或胶质状物质。 由于荚膜与染料的亲和力弱,不容易着色;而且可溶于水,易在用水冲洗时被除去。 所以通常用衬托染色法(负染色法)染色,使菌体和背景着色,而荚膜不着色,从而在菌体周围形成一透明圈。 由于

革兰氏染色法的意义

革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。 [2] 在治疗上,大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感(结核杆菌对青霉素不敏感):大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,它们能产生外毒素使人致病,可以选择青霉素族,头孢曲松钠等。

细菌的荚膜染色法

一、目的要求 学习并掌握荚膜染色法 二、基本原理 荚膜是包围在细菌  细胞外的一层粘液状或胶质状物质。 由于荚膜与染料的亲和力弱,不容易着色;而且可溶于水,易在用水冲洗时被除去。 所以通常用衬托染色法(负染色法)染色,使菌体和背景着色,而荚膜不着色,从而在菌体周围形成一透明圈。

革兰氏染色法的概念

革兰氏染色法,是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法,属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明,最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难区别。经染色后,阳性菌呈紫色,