环状沉淀反应实验

最简单、古老的一种沉淀试验。即在小口径试管内加入已知抗血清,沿管壁加入待检抗原于血清表面,若抗体与相应抗原发生反应,两层液面交界处出现白色环状沉淀,是为阳性,主要用于抗原的定性实验。实验方法原理当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。实验材料免疫血清试剂、试剂盒抗原生理盐水仪器、耗材小沉淀管毛细吸管橡皮头实验步骤1. 取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第一管,加时注意不能有气泡。2. 以毛细吸管吸取生理盐水0.2毫升加入第二管。3. 用毛细吸管吸入血稀释0.2毫升加入各管,加时应注意使抗原溶液缓缓由管壁流下,轻浮于血清面上,使成一明显界面,切勿使之相混。4. 置室温中10~20分钟,观察液面有无乳白色沉淀环,若有则为阳性。 ......阅读全文

免疫共沉淀的实验原理简介

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质

尿沉淀定量分析实验

是根据流式细胞仪工作原理专为尿液沉渣分析而设计,这类仪器价格较低,分析效率较高,尿液标本可不用离心,主要用于尿液细胞成分(红细胞、白细胞,和上皮细胞)的分析,这类仪器不仅可测定细胞数量,还可测量细胞容积和对某些细胞分类,如测定尿液红细胞容积(MCV)及容积分布密度(RDVV),有助于鉴别红细胞来源,

酸化丙酮/甲醇沉淀法实验

TCA 沉淀的另一有用的替代方法是使用酸化的丙酮-甲醇混合液。酸化有助于通过将去垢剂溶于有机相而蛋白质产生沉淀以去除样品中的 SDS。丙酮和甲醇都能以任何比例溶解于水中,因此不会发生相分离。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒盐酸丙酮甲醇实验步骤材料盐酸(高纯;如 J,T

酸化丙酮/甲醇沉淀法实验

酸化丙酮/甲醇沉淀法实验             试剂、试剂盒 盐酸 丙酮 甲醇

酸化丙酮/甲醇沉淀法实验

试剂、试剂盒 盐酸丙酮甲醇实验步骤 材料盐酸(高纯;如 J,T-Baker 的 Ultrex 级)丙酮(高纯;如 Aldrich 的金标级)甲醇(高纯;如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售级)操作程序本操作程序是根据 Current Protocolsin Molecu

颗粒自由沉降实验中沉淀去除率e和沉淀效率η的关系

颗粒自由沉降实验中沉淀去除率e和沉淀效率η在什么情况下可以认为近似相等悬浮物的去除率取决于沉淀速度与停留时间、水深沉降速度受比表面积(颗粒大小)影响自由沉淀去除率 = (进水悬浮物的总量SS-出水悬浮物的总量SS)/进水悬浮物的总量SS.水中悬浮颗粒在水中的沉降,根据水中悬浮颗粒的凝聚性能和浓度,沉

用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——丙酮沉淀法

实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒丙酮(或其他有机溶剂如乙醇或甲醇)仪器、耗材Eppendorf 管(小塑料离心管)Eppendorf 管离心机(小型台式离心机)混旋器实验步骤1. 加 1 ml冷丙酮(-20℃)至 200 ul 样品溶液,混匀。2. -20℃: 放置 10 min。3. 小型台式离

概述四氧化三铁沉淀法反应原理

  沉淀法由于其工艺操作简单成本较低,产品纯度高,组成均匀,适合于大规模生产,成为最常用的纳米颗粒的制备方法。同时,通过向沉淀混合液中加入有机分散剂或络合剂可提高纳米粒子的分散性,克服纳米粒子易团聚的缺点。常用的沉淀法有共沉淀法、水解沉淀法、超声沉淀法、醇盐水解法和螯合物分解法等。

沉淀反应的临床意义及注意事项

  临床意义  异常结果:当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。沉淀反应技术由于特异性很强,而被广泛应用于鉴定混合物中蛋白质组分,鉴定菌型,诊断疾病以及在法医上鉴定血迹等。如检查梅毒抗体的康氏反应。  需要检查的人群:受相关病毒感染者,或

沉淀反应的正常值及临床意义

  正常值  沉淀反应的反应曲线中,抗原抗体分子比例合适的范围称为等价带。结果是呈阴性。  临床意义  异常结果:当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。沉淀反应技术由于特异性很强,而被广泛应用于鉴定混合物中蛋白质组分,鉴定菌型,诊断疾病以

沉淀反应的注意事项与检查过程

  注意事项  不合宜人群:无特殊要求。  检查前禁忌:禁忌暴饮暴食,最好是在早上空腹检测。  检查时的要求:根据免疫沉淀的结果,可以对盐浓度做一定的调整,如果沉淀的杂蛋白较多可适当增加盐浓度,如果抗体与目的蛋白的结合力较弱则适当减低盐浓度。  检查过程  沉淀反应分两个阶段,第一阶段发生抗原抗体特

快速血浆反应素环状卡片试验的注意事项有哪些

  检查前要求:  1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。  2、体检前一天的晚八时以后,应开始禁食12小时,以免影响检测结果。  检查时要求:抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩,增加采血的困难。  不合宜人群:一般无特殊人群。

快速血浆反应素环状卡片试验的临床意义是什么

  异常结果:  梅毒病的辅助诊断法之一。已知病史或有梅毒体征者。该试验阳性可确诊为梅毒病。初次感染梅毒数周后,效价可高达1:4—1:256。红斑狼疮、麻风病,急性感染,自身免疫性疾病,传染性肝炎,疟疾和类风湿性关节炎等也可呈阳性,但一般不超过1:8,应注意鉴别诊断。  需要检查人群:疑似梅毒病患者

免疫沉淀的实验方法介绍

免疫沉淀的实验过程比较简单,一般分为3个阶段;①抗原溶液的制备;②裂解物非特异性本底的预处理;③免疫复合物的形成与纯化。 免疫沉淀的第一步是制备抗原溶液。任何抗原溶液均可作为免疫沉淀的材料来源,但免疫沉淀一般采用细胞或组织制备的裂解物。裂解物的制备可采用多种方法,其中首选用温和的去污剂如非离子去污剂

免疫共沉淀确定结合蛋白实验

            实验材料 培养基中生长的适宜细胞株 试剂、试剂盒 乙腈 考马斯亮蓝 R-250 EBC 裂解缓冲液

关于免疫共沉淀的实验流程介绍

  (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C,最大转速离心30 min后取上清;  (2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4℃缓慢摇晃孵育过夜;  (3)取1

免疫共沉淀确定结合蛋白实验

当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合保持下来。这一亊实可被用于检测和确定生理条件下相关的蛋白质-蛋白质间相互作用。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒乙腈考马斯亮蓝

免疫共沉淀确定结合蛋白实验

实验材料 培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒 乙腈考马斯亮蓝 R-250EBC 裂解缓冲液NETN磷酸盐缓冲溶液SDS 凝胶加样缓冲液三氟乙酸胰蛋白酶胰蛋白酶消化缓冲液沉淀靶蛋白的抗体对照抗体不连续的 SDS-PAGE 梯度胶仪器、耗材 沸水浴蛋白质 A-Sepharose平板摇台实验步骤 材料缓

沉淀-σ32-和-RNA-聚合酶实验

            试剂、试剂盒 聚乙烯亚胺 仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置 聚丙烯酰胺小胶

沉淀-σ32-和-RNA-聚合酶实验

试剂、试剂盒 聚乙烯亚胺仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶(10%)试剂聚乙烯亚胺(PEI)(6% 储液,pH7.9)(配方,见“试剂的配制”,pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (见 p.153)

沉淀-σ32-和-RNA-聚合酶实验

试剂、试剂盒聚乙烯亚胺仪器、耗材SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶实验步骤材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶(10%)试剂聚乙烯亚胺(PEI)(6% 储液,pH7.9)(配方,见“试剂的配制”,pp.184~189)操作程序1)0.2%DOC 上清 (见 p.153), 取 6

关于免疫共沉淀的实验过程介绍

(1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C, 最大转速离心30 min后取上清;(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;(3)取10μl

乙醇沉淀蛋白质的实验目的

纯化蛋白,或使蛋白变性,或去除蛋白都有可能。

高校基础滴定实验——沉淀滴定法

银量法沉淀滴定沉淀滴定法是一种以沉淀反应为基础的分析方法,反应实质为Ag++Cl-=AgCl  ,传统的手动滴定方式,通过不在有沉淀生成来判定终点,误差较大,且对操作上要求较高,相对于操作不熟练的学生来讲较为困难,目前更多高校选择电位滴定仪授课,通过等当点电位突跃判定滴定终点,结果更准确,操作更方便

为什么噬菌体实验沉淀物

1.若用35s标记的噬菌体侵染大肠杆菌,理论上沉淀物中不含放射性,但可能由于搅拌不充分,有少量35s的噬菌体蛋白质外壳吸附在细菌表面,随细菌离心到沉淀物中,使沉淀物也有一定放射性2.用32p标记的噬菌体侵染大肠杆菌,理论上在上清液中不含放射性,下层沉淀物中应具有很高的放射性,而实验最终结果显示在离心

免疫沉淀(Immunoprecipitation)实验材料和方法

免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。材料:上样buffer的配方(用前现配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SDS10ul 80% glycerol2ul br

免疫共沉淀溶液准备和实验程序

1. 溶液准备:RIPA缓冲液:50mM Tris-HCl pH7.4 ,150mM NaCl ,1mM EDTA,1%Triton×100,1%去氧胆酸钠,0.1%SDS,1mM PMSF,1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 ( aprotinin ) , 1μg/ml亮抑蛋白酶肽 ( leu

免疫沉淀(Immunoprecipitation,-IP)实验方法

 基本实验步骤 (1)收获细胞,加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清; (2) 取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解

免疫共沉淀实验操作方法介绍

  1.用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。  2.将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。  3.收集上清(约30 ml)并加入30μg的适当抗体,4℃摇动免疫沉淀物1 h。  4.加入

关于沉淀反应—单向琼脂扩散(simple-agar-diffusion)-的介绍

  单向琼脂扩散(simple agar diffusion) 简称单扩,将特异性抗体与熔化的琼脂混合均匀,使抗体均匀分布于琼脂,然后浇制成琼脂板,再按一定要求打孔并加入抗原,使抗原向孔周自由扩散,与板中的抗体形成沉淀圈。本法为定量试验,沉淀圈的直径与抗原浓度成正比。单扩常用于血清中免疫球蛋白、AF