细胞培养的一般过程
一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试,具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组......阅读全文
原代细胞培养时离心的转速一般多少
一、实验前准备工作:1、培养瓶的包被:包被液如多聚赖氨酸(PLL,ScienCell品牌,货号0403或0413)或纤维粘连蛋白(BPF,ScienCell品牌,货号8248),以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。37度孵箱1小时或4度过夜,从包被好的培养瓶中回收多聚赖氨酸,并用无菌水洗
原代细胞培养时离心的转速一般多少
一、实验前准备工作:1、培养瓶的包被:包被液如多聚赖氨酸(PLL,ScienCell品牌,货号0403或0413)或纤维粘连蛋白(BPF,ScienCell品牌,货号8248),以无菌水稀释至2 ug/cm2的浓度包被培养瓶。37度孵箱1小时或4度过夜,从包被好的培养瓶中回收多聚赖氨酸,并用无菌水洗
动物细胞培养的一般步骤是什么
一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。3.把上清液倒掉,加1ml培
细胞培养过程常见问题
1.为什么培养的细胞要及时传代? 答:体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性,也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候,它就会停止生长,及时传代后,细胞的生长得以继续。2.培养液pH下降很快可能原因有哪些?其解决办法是什么? 答:通常细胞生长得非常快时,pH值通常下降得很快。此时可以及时
缩醛(酮)生成的一般过程
缩醛(酮)生成的一般过程:
血细胞发育过程的一般规律
血细胞发育成熟中的形态演变规律(如下表)
培养基的配制一般过程
1.配料配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。2.溶解淀粉溶解:少量冷水调成糊状加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。3.调PH用1N的盐酸或
常见吸能反应的一般过程
一些化学反应,像光合作用,电解炼铝……都是吸能反应。放能反应产生的能量,在一般的情况下,都以热能的形式释放出来,不能直接变成机械能、电能或者光能,不过也有例外。放能反应是释放能量的一种,如果热是以这种形式释放,就可以用另一个名词“放热”。在这些名词中,erg指的是功或能,therm指的是热,自发的反
PCR技术的程序和一般过程
试剂(1)引物:决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同,选用不同引物,每种病原微生物都有自己特异的引物。(2)耐热的DNA聚合酶:此酶是从耐热细菌中分离出来的,能耐受高温90℃-100℃。(3)10×PCR缓冲液:500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH8.4,20℃)
药物鉴别试验的一般过程
1.外观外观是指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。如药典对阿莫西林的描述为“本品为白色或类白色结晶性粉末;味微苦”。2.溶解度溶解度是药物的一种物理性质,可以在一定程度上反映药品的纯度。药典描述药品在不同溶剂中的溶解性能时,采用下列名词术语表示:如盐酸苯海拉明“在水中极易溶解,在乙醇或三氯
X射线衍射的一般实验过程
1.样品制备对于粉末样品,通常要求其颗粒的平均粒径控制在5mm左右,即过320目(约40mm)的筛子,还要求试样无择优取向.因此,通常应用玛瑙研钵对待测样品进行充分研磨后使用.对于块状样品应切割出合适的大小,即不超过铝制样品架的矩形孔洞的尺寸,另外还要用砂轮和砂纸将其测试面磨得平整光滑.2.充填试样
细胞培养原代培养的基本过程
原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种、加培养液、置培养条件下培养等步骤,在所有的操作过程中,都必须保持培养物及生长环境的无菌。
概述动物细胞培养的基本过程
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或用胶原蛋白酶)处理(消化),形成分散的单个细胞,将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。此时需要将出现接触
细胞培养过程常见的污染源
细胞培养过程中如果操作不当或者条件控制不合适见容易受到化学或者生物因素的污染,常见的污染源有:1.细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较
细胞培养过程常见的污染源
细胞培养过程中如果操作不当或者条件控制不合适见容易受到化学或者生物因素的污染,常见的污染源有:1.细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较
发酵过程参数一般有哪些
发酵过程是一种既古老又年轻的生化过程.在生物化学中把细菌和酵母等微生物在无氧条件下,酶促降解糖分子产生能量的过程.指微生物分解有机物质的过程.现代对发酵的定义应该是:通过微生物(或动植物细胞)的生长培养和化学变化,大量产生和积累专门的代谢产物的反应过程.根据发酵的特点和微生物对氧的不同需要,可以将发
动物细胞培养一般能传到多少代
一般来说,细胞在传至10~50代左右时,增殖会逐渐缓慢,以至于完全停止,这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时,少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限、获得不死性,这些细胞已经发生了突变,正在朝着等同于癌细胞的方向发展。所以说,一般能传到50代为最高了。。
动物细胞培养一般能传到多少代
一般来说,细胞在传至10~50代左右时,增殖会逐渐缓慢,以至于完全停止,这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时,少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限、获得不死性,这些细胞已经发生了突变,正在朝着等同于癌细胞的方向发展。所以说,一般能传到50代为最高了。。
细胞培养过程中的支原体污染?
支原体污染支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2μm并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性.可为圆形、丝状或梨形。
细胞培养过程中常见的问题说明
通过多次与客户的了解和反馈,赛百慷的售后服务人员发现,客户在收到经过专业包装的细胞后,由于没有经过系统专业的检查和处理,就直接进行实验,以致于后期容易产生了一系列问题。鉴于客户对这一方面的知识有所欠缺薄弱,赛百慷的技术人员经过总结,对于在收到细胞怎样专业处理做了以下说明:一、问:细胞收到之后怎么处理
细胞培养细胞复苏的操作过程
①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶
HEPES在细胞培养过程中的作用
HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。
空气微生物采样一般过程
每bai种微生物都有其最适pH值和du一定的pH范围。在最适范围内zhi酶活性最高,如果其他条件适合,微生物的生dao长速率也最高。大多数细菌、藻类和原生动物的最适pH为6.5-7.5,在pH 4-10之间也可以生长;放线菌一般在微碱性即pH7.5-8最适合;酵母菌、霉菌则适合于pH5-6的酸性环
细胞培养液一般几天换一次
一般2-3天换液,如果长得快,培养基变黄了,可能就要每天换,根据情况。齐氏生物建议一般长满瓶底80%就可以传代了。传代也要看细胞习性,有的细胞传的稀了就不长,有的细胞照样能长。
细胞培养液一般几天换一次
一般2-3天换液,如果长得快,培养基变黄了,可能就要每天换,根据情况。齐氏生物建议一般长满瓶底80%就可以传代了。传代也要看细胞习性,有的细胞传的稀了就不长,有的细胞照样能长。
细胞培养液一般几天换一次
一般2-3天换液,如果长得快,培养基变黄了,可能就要每天换,根据情况。齐氏生物建议一般长满瓶底80%就可以传代了。传代也要看细胞习性,有的细胞传的稀了就不长,有的细胞照样能长。
降低上皮细胞培养过程中的污染
实验方法原理上皮细胞易存在纤维细胞污染,其污染程度能够采用特异的中等纤维蛋百亚基波形蛋内(vimentin,作为成纤维细胞的标记)和角蛋白(作为上皮细胞的标 记)抗体进行双重免疫荧光染色。关于如何降低污染的方法前面已述及;另一种用来降低贴壁上皮细胞群屮成纤维细胞数量的方法是采用不同浓度的胰蛋白酶
混合淋巴细胞培养试验的检查过程
检查过程(1)供体淋巴细胞的制备 新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上 2000 r/min离心20 min,吸取中间雾状淋巴细胞层,生理盐水洗涤2次,台盼蓝染色,计数板计数。调整细胞密度为2×10^9/L,分成3管,各自离心,留取沉淀。 每
细胞培养过程常见的污染源有哪些?
1.细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。污染后细胞发生
降低上皮细胞培养过程中的污染
实验方法原理上皮细胞易存在纤维细胞污染,其污染程度能够采用特异的中等纤维蛋百亚基波形蛋内(vimentin,作为成纤维细胞的标记)和角蛋白(作为上皮细胞的标 记)抗体进行双重免疫荧光染色。关于如何降低污染的方法前面已述及;另一种用来降低贴壁上皮细胞群屮成纤维细胞数量的方法是采用不同浓度的胰蛋白酶化。