细胞生长检测8:三磷酸腺苷检测法(ATP法)

三磷酸腺苷检测法(ATP法)1.ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在-20℃长期保存。2.在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中(每孔含100μl细胞培养液),每孔加0.1ml ATP释放因子,室温中反应5分钟。取另一块96孔细胞培养板,从第一块板的各孔中吸0.1ml细胞溶解物到第二块板的相应各孔。3.在低于25℃中,将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。用自动加样器,每孔加入20μl ATP反应液,立即检测10秒钟的荧光强度。温度升高,检测敏感性就下降。4.用RLU(Y轴)对细胞因子标准品的稀释度(X轴)作标准曲线,根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。......阅读全文

XTT检测法检测细菌生长

用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤,XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物(formazan)。代谢产物在OD450处有吸收峰。

关于腺苷三磷酸酶(ATP酶)基本介绍

  ATP酶又称为三磷酸腺苷酶,是一类能将三磷酸腺苷(ATP)催化水解为二磷酸腺苷(ADP)和磷酸根离子的酶,这是一个释放能量的反应。在大多数情况下,能量可以通过传递而被用于驱动另一个需要能量的化学反应。这一过程被所有已知的生命形式广泛利用。

大鼠三磷酸腺苷(ATP)试剂盒使用说明

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠三磷酸腺苷(ATP),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。用    途:用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中三磷酸腺苷(ATP)测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠三磷酸腺苷

简述腺苷三磷酸酶(ATP酶)的反应机制

  ATP酶与ATP水解反应耦合的转运是一个严格的化学反应,即每分子ATP水解能够使一定数量的溶液分子被转运。例如,对于钠钾ATP酶,每分子ATP水解能够使3个钠离子被运出细胞,同时2个钾离子被运入。  跨膜ATP酶需要ATP水解所产生的能量,因为这些酶需要做功:它们逆著热力学上更容易发生的方向来进

概述腺苷三磷酸酶(ATP酶)的作用机制

  关于ATP酶催化ADP氧化磷酸化成ATP的机制,先后提出过几种假说  1、化学偶联假说;  2、构象假说;  3、化学渗透假说。  目前流行的是化学渗透假说,由英国生物化学家P.Mitchell于1961年提出。该学说很好地说明线粒体内膜中电子传递、质子电化学梯度建立、ADP磷酸化的关系,并具有

合理作用腺苷三磷酸酶(ATP酶)的介绍

  ATP作为一种辅酶,有改善肌体代谢的作用,可参与体内脂肪、蛋白质、糖、核酸、核苷酸等代谢过程。它同时又是体内能量的主要来源,为吸收、分泌、肌肉收缩以及进行生化合成反应等过程提供所需要的能量。常用于心肌病、肝炎、进行性肌萎缩、神经性耳聋等疾病的治疗.  ATP广泛用于改善机体代谢,以及疾病的辅助治

关于ATP荧光检测法的仪器介绍

  ATP荧光检测法的仪器:当仪器和试剂配合使用,整体灵敏度达到10-10摩尔ATP范围时,可以用于 食品表明微生物检测、手卫生检测、餐饮器具洁净度检测、重点科室和重要活动场所(如奥运会、世博会、人大政协会议等)物表检测和卫生安保、食品加工器具、工作台等关键控制点消毒结果检测、医疗环境工作平台(器械

大鼠白介素8(IL8)ELISA检测法

大鼠白介素-8(IL-8)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 IL-8 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IL-8与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠IL-8,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的St

大鼠干细胞生长因子(SCF)ELISA检测法

大鼠干细胞生长因子(SCF)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 SCF 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 SCF与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠SCF,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Str

大鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA检测法

大鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 HGF 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 HGF与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠HGF,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Stre

仓鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒使用说明

仓鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的

概述腺苷三磷酸酶(ATP酶)的生理功能

  人体预存的ATP能量只能维持15秒,跑完一百公尺后就全部用完,不足的继续通过呼吸作用等合成ATP。纯净的ATP呈白色粉末状,能溶于水,作为药品可以提供能量并改善患者新陈代谢。ATP片剂可以口服,注射液可供肌肉注射或静脉注射。  能源物质  肌肉中储藏着多种能源物质,主要有三磷酸腺苷(ATP)、磷

细菌生长检测之AlamarBlueTM摄入法

1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料,96孔细胞培养板每孔20μl。 3、在培养结束后,直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm,用OD570减去OD600即为活细胞还

大鼠腺苷脱氨酶(ADA)ELISA检测法

大鼠腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 ADA 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 ADA与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠ADA,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Strep

酶法检测磷酸化实验

实验方法原理实验材料 含 100~200 μg 总蛋白的样品试剂、试剂盒  50 mmol L NN'-2-羟丙磺酸哌嗉(PIPES)Sephadex G-25 柱(可选)PIPES 2-ME 或 RPERS DTT 缓冲液马铃薯酸性磷酸酶2 × SDS-PAGE 样品缓冲液100 mmol

酶法检测磷酸化实验

基本方案1 非特异酸性磷酸酶消化磷酸蛋白质 基本方案2 丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶消化磷酸蛋白质             实验方法原理实验材料 含 100~200 μg 总蛋白的样品 试

关于腺苷三磷酸酶(ATP酶)合成酶的介绍

  ATP合成酶是一类线粒体与叶绿体中的合成酶,它广泛存在于线粒体、叶绿体、原核藻、异养菌和光合细菌中,是生物体能量代谢的关键酶。  ATP合成酶可以在跨膜质子动力势的推动下,利用ADP和Pi催化合成生物体的能量“通货”——ATP。一般来说,机体所需的大多数ATP都是由ATP合酶产生的。据估计,人体

ELISA法检测细胞凋亡

(一) 原理细胞凋亡的发生,是由于钙-镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA,产生180bp~200bp或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法,应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特

细胞增殖检测:MTT法

细胞增殖检测:MTT法             实验方法原理 MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-

细胞增殖检测:MTT法

MTT法,又称MTT比色法,可以用于:检测细胞存活和生长。实验方法原理MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。MTT 为黄色化合物,是一种接受氢离子的染

大鼠生长激素(GH)ELISA检测法

大鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 GH 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的GH与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠GH,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin

萤火虫萤光素酶在ATP检测中的应用

前言:生物发光是一种在生物体内由酶将化学能转化为光能的现象,在自然界中有超过30种生物发光体系,而我们所熟知的萤火虫的发光体系就是其中研究最早,应用也最广泛的一种。萤火虫的发光现象是由其体内的萤光素酶(luciferase)的催化下三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP

关于腺苷三磷酸酶(ATP酶)的基本功能介绍

  跨膜ATP酶可以为细胞输入许多新陈代谢所需的物质并输出毒物、代谢废物以及其他可能阻碍细胞进程的物质。例如,钠钾ATP酶(又称为钠/钾离子ATP酶)能够调节细胞内钠/钾离子的浓度,从而保持细胞的静息电位;氢钾ATP酶(又称为氢/钾离子ATP酶或胃质子泵)可以使胃内保持酸化环境。  除了作为离子交换

腺苷三磷酸酶(ATP酶)的能源物质的代谢功能介绍

  (一)无氧代谢  剧烈运动时,体内处于暂时缺氧状态,在缺氧状态下体内能源物质的代谢过程,称为无氧代谢。它包括以下两个供能系统。  ①非乳酸能(ATP—CP)系统—一般可维持10秒肌肉活动无氧代谢。  ②乳酸能系统—一般可维持1—3分的肌肉活动非乳酸能(ATP—CP)系统和乳酸能系统是从事短时间、

细胞介导细胞毒作用检测法6:荧光法检测CMC

荧光法检测CMC1.用含10%小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2.取96孔圆底细胞培养板,每孔加0.1ml K562细胞悬液;每孔加适量PBMC使效靶比为1:1~5:1,每种处理3个复孔;3个对照孔只加

酶法检测磷酸化实验1

基本方案1 非特异酸性磷酸酶消化磷酸蛋白质对可逆蛋白质磷酸化在调节植物和动物细胞生理过程中起重要作用的认识正不断加深,许多技术都能用于揭示共价结合于蛋白质的磷酸基的存在。用 32P 代谢标记细胞随后分离 32P 标记蛋白质是揭示蛋白质磷酸化的最直接方法。实验材料含 100~200 μg 总蛋白的样品

酶法检测磷酸化实验2

基本方案2 丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶消化磷酸蛋白质实验方法原理蛋白质磷酸酶和上面讨论的普通磷酸酶不同,它可在磷酸蛋白质底物的不同位点选择性脱磷酸化,因而可用于研究与蛋白质键合的特定磷酸基的功能性作用。实验材料含 100 μg 总蛋白的样品试剂、试剂盒 50 mmol/L Tris • Cl缓冲液 /

10.2流式细胞法の淋巴细胞亚群检测(三)

四.流式细胞亚群的临床指南(节选)五.流式细胞亚群儿科临床应用共识(节选)

ATP荧光检测仪的概述

ATP荧光检测仪的概述ATP(Adenosine Triphosphate),中文名为腺嘌呤核苷三磷酸,又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于细菌等微生物细胞内,ATP是微生物新陈代谢的能量物质。ATP生物发光法是利用ATP试剂中若干组分如荧光素-荧光素酶等与被测样本反应产生光子,再利用专门研制的荧光检测仪来

生化检测项目血浆环磷酸腺苷介绍

血浆环磷酸腺苷介绍:  血浆环磷酸腺苷是一种小分子半抗原环磷酸腺嘌呤核苷是普遍存在于生物细胞和体液中的一种耐热小分子化合物,由ATP在腺苷酸环化酶及Ca2+参与下生成。cAMP和cGMP一起共同调节,控制细胞的生长和繁殖,并且和多种生理,生化代谢过程有密切关系,是细胞内的第二信使。血浆环磷酸腺苷正常