细胞生长检测1:[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数
[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数1.用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2.用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×105/ml。3.在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品,每个稀释度三个复孔,标准IL-2从40 IU/ml稀释到0.019 IU/ml(8~10个稀释度),阴性对照孔不加IL-2。4.每孔加0.1ml细胞悬液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养18~24小时。每孔加10μl(0.5μCi或1.85×104Bq)[3H]脱氧胸苷,继续培养4小时。5.用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上,用3%醋酸水溶液滤纸3次,洗去游离的[3H]TdR。将滤纸置液体闪......阅读全文
细胞生长检测1:[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数
[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数1.用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2.用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×
[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数
[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数:1、用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2、用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1
细胞介导细胞毒作用检测法2:[3H]脱氧胸苷释放法
[3H]脱氧胸苷释放法1)标记靶细胞1.用含5%小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml,取10μCi(370kBq)[3H]TdR加到1ml靶细胞中,37℃水浴标记4~6小时,每30分钟摇晃一次。2.用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次,每次400×g 10分钟。用含5%小
细胞生长检测方法:染料染色法测定细胞数
一、结晶紫检测法1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104 ~104 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2 的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品,根据需要3~5倍递
细胞生长检测9:染料染色法测定细胞数
染料染色法测定细胞数1)结晶紫检测法1.在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。2.用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品,
细胞生长检测6:AlamarBlueTM摄入法
AlamarBlueTM摄入法1.按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2.在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料,96孔细胞培养板每孔20μl。3.在培养结束后,直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm,用OD570减去OD
细胞生长检测方法:AlamarBlueTM摄入法
AlamarBlueTM 摄入法 1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料,96孔细胞培养板每孔20μl。 3、在培养结束后,直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm,
细胞化学词汇胸苷酸
中文名称:胸苷酸英文名称:Thymidine-5'-monophosphoric acid英文别名:thymidine 5-monophosphate free acid; thymidine 5-(dihydrogen phosphate); 1-(2-deoxy-5-O-phosphon
细胞化学词汇胸苷三磷酸
中文名称:胸苷三磷酸英文名称:thymidine triphosphate;TTP定 义:通常指脱氧胸苷三磷酸(dTTP)。由(脱氧)胸苷与三个磷酸基团连接而成的化合物。胸苷-5′-三磷酸是DNA合成的原料之一。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇胸苷一磷酸
中文名称:胸苷一磷酸英文名称:thymidine monophosphate;TMP定 义:通常指脱氧胸苷一磷酸(dTRMP)。由脱氧胸苷与一个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧肌苷
中文名称:脱氧肌苷英文名称:deoxyinosine定 义:次黄嘌呤的N-9与2-脱氧-D-核糖的C-1通过β糖苷键相连接所形成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇胸苷二磷酸
中文名称:胸苷二磷酸英文名称:thymidine diphosphate;TDP定 义:通常指脱氧胸苷二磷酸(dTDP)。由(脱氧)胸苷与两个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇-脱氧鸟苷酸
中文名称:脱氧鸟苷酸英文名称:deoxyguanylic acid定 义:脱氧鸟苷的磷酸酯。视连接部位不同,有脱氧鸟苷3′-磷酸(3′-脱氧鸟苷酸)和脱氧鸟苷5′-磷酸(5′-脱氧鸟苷酸)两种。体内通常是5′-磷酸酯。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧鸟苷酸
中文名称:脱氧鸟苷酸英文名称:deoxyguanylic acid定 义:脱氧鸟苷的磷酸酯。视连接部位不同,有脱氧鸟苷3′-磷酸(3′-脱氧鸟苷酸)和脱氧鸟苷5′-磷酸(5′-脱氧鸟苷酸)两种。体内通常是5′-磷酸酯。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧鸟苷一磷酸
中文名称:脱氧鸟苷一磷酸英文名称:deoxyguanosine monophosphate;dGMP定 义:由脱氧鸟苷和一个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧胞苷一磷酸
中文名称:脱氧胞苷一磷酸英文名称:deoxycytidine monophosphate;dCMP定 义:由脱氧胞苷与一个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
表皮干细胞形态及动力学特征
显微镜下表皮干细胞形态较为原始,体积小,核大,核浆比例大,流式细胞仪分析表皮干细胞多数处于静止期、DNA合成前期,其分裂增殖活动相对静止(在活体内注射3H标记的脱氧胸苷或溴化脱氧尿苷(BrdU,可标记细胞的DNA)后其标记可在表皮干细胞中长期保持不变,而其他如短暂增殖细胞等随着细胞的不断分裂增殖
表皮干细胞形态及动力学特征
显微镜下表皮干细胞形态较为原始,体积小,核大,核浆比例大,流式细胞仪分析表皮干细胞多数处于静止期、DNA合成前期,其分裂增殖活动相对静止(在活体内注射3H标记的脱氧胸苷或溴化脱氧尿苷(BrdU,可标记细胞的DNA)后其标记可在表皮干细胞中长期保持不变,而其他如短暂增殖细胞等随着细胞的不断分裂增殖其标
寡聚脱氧胸苷纤维素纯化带-poly(-A)+RNA
试剂、试剂盒 NaOH.寡聚脱氧胸苷 (oligo(dT) ] 纤维素DEPC 处理的水1X 加样缓冲液洗脱缓冲液 NaAc(pH5.2)乙醇 TE 缓冲液。。实验步骤 一 材料与设备1 ) 5 mol/L NaOH2 ) 寡聚脱氧胸苷 (oligo(dT) ] 纤维素3) DEPC 处理的水4)
寡聚脱氧胸苷纤维素纯化带-poly(-A)+RNA
试剂、试剂盒 NaOH.寡聚脱氧胸苷 (oligo(dT) ] 纤维素 DEPC 处理的水 1X 加样缓冲液 洗脱缓冲液 NaAc(pH5.2)
寡聚脱氧胸苷纤维素纯化带-poly(-A)+RNA
大多数哺乳动物的信使 RNA( mRNA) 都带冇 poly( A)+ 尾 ,使用本方案可以将带Poly ( A) +的 RNA 从总 RNA 中分离出來。试剂、试剂盒NaOH.寡聚脱氧胸苷 (oligo(dT) ] 纤维素DEPC 处理的水1X 加样缓冲液洗脱缓冲液NaAc(pH5.2)乙醇TE
细胞化学词汇脱氧肌苷三磷酸
中文名称:脱氧肌苷三磷酸英文名称:deoxyinosine triphosphate定 义:脱氧肌苷的三磷酸酯,体内通常是脱氧肌苷5′-三磷酸。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧鸟苷二磷酸
中文名称:脱氧鸟苷二磷酸英文名称:deoxyguanosine diphosphate;dGDP定 义:由脱氧鸟苷和两个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇-脱氧鸟苷二磷酸
中文名称:脱氧鸟苷二磷酸英文名称:deoxyguanosine diphosphate;dGDP定 义:由脱氧鸟苷和两个磷酸基团连接而成的化合物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇脱氧鸟苷三磷酸
(GTP)即是鸟嘌呤-5'-三磷酸。在生物化学的全名为9-β-D-呋喃核糖鸟嘌呤-5'-三磷酸,或者是9-β-D-呋喃核糖-2-氨基-6-氧-嘌呤-5'-三磷酸。GTP是DNA复制时的引物(Primer,其实是RNA)和转录(即是mRNA的生物合成)时的鸟嘌呤核苷酸的提供者。
细胞生长检测——直接计数细胞
1、如果靶细胞是帖壁细胞,在细胞因子作用适当时间后,用生理盐水洗去死亡细胞,用0.25%胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打,使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。2、如果靶细胞是悬浮细胞,则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞,活细胞可以排除进入细胞的台盼
细胞增殖检测:3H同位素渗入实例
一、原理 淋巴细胞在有丝分裂原PHA、ConA 等的刺激下,产生增殖反应,DNA和RNA合成明显增加,如在培养液中加入3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR),则可被转化中的细胞摄入。测定标记淋巴细胞的放射强度可反映淋巴细胞增殖的程度。 二、仪器和材料 RPMI-1640 细胞培养液、小牛血清、2-巯
染料染色法测定细胞数
结晶紫检测法: 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104~10×4 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。 2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品,根据需要3
免疫印迹法测定乳腺肿瘤患者胸苷激酶
【摘要】 目的 探讨用免疫印迹发光法,检测乳腺肿瘤患者血清细胞质胸苷激酶(TK1)的研究及临床应用。方法 利用抗胸苷激酶单克隆抗体(anti-TK1mAb)建立点免疫印迹发光法,分析乳腺肿瘤患者、非肿瘤患者和体检健康者血清TK1的水平。结果 术前的乳腺癌患者、乳腺良性肿瘤患者、非肿瘤患者和体检健康者
细胞生长检测10:直接计数细胞
直接计数细胞1.如果靶细胞是帖壁细胞,在细胞因子作用适当时间后,用生理盐水洗去死亡细胞,用0.25%胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打,使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。2.如果靶细胞是悬浮细胞,则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞,活细胞可以排除进