异源表达经验谈（3）
4. 菌种的保存、退化一般来说是加甘油20%左右，-70保存；或制成干粉保存。但是在做甲醇酵母时发现了个问题，就是重组工程菌的退化现象比较严重，一般都是学生做得好好的，但是毕业以后下面的师弟一接手，蛋白就不表达了，或表达量非常的低。连续好几个师兄的结果都是如此，很是奇怪。我猜测可能是由于整合入基因组，毕竟是个外源的基因，不知整合到了染色体的什么部分，会不会过段时间就给“踢”下来，或就沉寂了？E.coli在复苏时都有抗性压着，酵母好像没有太合适的（不知pPICZ系列的那个抗生素好用不好用，但毕竟好贵）。我有个想法，是否也应像公司在做工程细胞时那样，挑个几十上百个，一起传代，10几代后仍然稳定表达的才说明基因整合到了合适的部位，不会再下来了？但是毕竟做研究生没那么多时间来干这个，否则万一不行毕业就困难了。有没有其他解决方法呢？盼高手。 5. 拷贝数对表达量的影响对于“游离”的质粒，比如E.coli的BL21表达时，质粒的拷......阅读全文
异源双链分析的概念
中文名称异源双链分析英文名称heteroduplex analysis;HA定 义一种测定基因突变的方法。即依据野生型和突变型DNA分子经加热变性和复性后产生异源双链，在非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，同源双链和异源双链的泳动性不同。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（
异源抗血清的功能介绍
中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定 义来源于异种动物(如马对人)，含特异性抗体的血清。应用学科免疫学（一级学科），免疫病理、临床免疫（二级学科），感染免疫（三级学科）
异源载体疫苗的基本介绍
中文名称异源载体疫苗英文名称heterologous carrier vaccine定 义一种新型疫苗。即将疫苗附着在大分子载体上，以增强其免疫原性。所用载体一般是具有免疫原性的大分子蛋白质或减毒的活病毒、细菌。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫预防（三级学科）
真核细胞表达系统3
由于腺病毒易于培养、纯化，宿主范围广，故采用该类病毒构建的载体被广泛应用腺病毒载体的构建依赖于腺病毒穿梭质粒和包装载体之间的同源重组。但是哺乳动物细胞内的这种同源重组效率很低，利用细菌内同源重组法构建重组体效率会大大提高，即将外源基因插入到腺病毒穿梭质粒中，形成转移质粒，将其线性化后与腺病毒包装质粒
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法l 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞1. 转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法* 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀：
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2. 含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（5）
或者第5步和第6步改为丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。6.15000g,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。样品是酵母细胞超声后离心获得的上清，用Loading buffer溶解蛋白沉淀，始终不
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。用无机盐进行大规模发酵，更省钱。大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。一个批次100h左右估计3－4 瓶氧气。
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。2、温度： 在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概 5-6左右。pH3的时候
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌体密度：菌体是在BMMY中培养的，可以不用BMMY做对照，在600nm处测OD值，培养基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母（不换液，补料），生长阶段结束后，密度可达到10-12，诱导培养结束后，密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY，在生长阶段结束后，换液时，加入1/
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞*用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1.PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2.含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.重组质粒转化有lacIq 等位基因的大肠杆菌
异源[染色体]配对的概念
中文名称异源[染色体]配对英文名称heterogenetic pairing定 义源自不同祖先的染色体在减数分裂前期中的配对。应用学科遗传学（一级学科），细胞遗传学（二级学科）
异源载体疫苗的概念和作用
中文名称异源载体疫苗英文名称heterologous carrier vaccine定 义一种新型疫苗。即将疫苗附着在大分子载体上，以增强其免疫原性。所用载体一般是具有免疫原性的大分子蛋白质或减毒的活病毒、细菌。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫预防（三级学科）
关于异源多倍体的介绍
异源多倍体（allopolyploid）生物学名词，指不同物种杂交产生的杂种后代经过染色体加倍形成的多倍体。常见的多倍体植物大多数属于异源多倍体，例如，小麦、燕麦、棉、烟草、苹果、梨、樱桃、菊、水仙、郁金香等。对应的有同源多倍体，同一物种经过染色体加倍形成的多倍体，称为同源多倍体。
关于异源同源基因的基本介绍
异源同源基因（xenologous gene）是由于基因在不同物种间的横向转移（horizontal transfer）而产生的。异源同源基因在原核生物中研究比较多。最近研究表明，异源同源基因的原位取代xenolo—gous gene displacement in situ)是细菌进化的强大推
异源双链体的结构特点
中文名称异源双链体英文名称heteroduplex定 义不同来源的单链DNA分子杂交形成的DNA双链。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
关于异源多倍性的基本介绍
异源多倍性(allopolyploidy)指不同种的染色体组组合在一起而产生的染色体倍数的变异（H．Kihara，T．Ono，1926）。根据组成核型的染色体组的数目又可分别称为异源三倍体、异源四倍体、异源…倍体等（allotriploid，allote -traploid，sllo…ploid
异源性ACTH的鉴别诊断介绍
异源性ACTH易混淆的症状鉴别诊断 (1)促肾上腺皮质激素细胞腺瘤：临床表现为身体向心性肥胖、满月脸、水牛背、多血质、腹部大腿部皮肤有紫纹、毳毛增多等。重者闭经、性欲减退、全身乏力，甚至卧床不起。有的病人并有高血压、糖尿病等。 (2)黑色素刺激素细胞腺瘤：非常少见，只有个别报告病人皮肤黑色沉
简述异源性ACTH的缓解方法
异源性ACTH的预防 1.根治性或姑息性手术。 2.肾上腺皮质阻滞剂或毒素类药物(前者如氨苯哌酮、吡啶异丙酮、酮康唑。 3.对症处理(如螺旋内酯等)。 4.保持乐观愉快的情绪。长期出现精神紧张、焦虑、烦燥、悲观等情绪，会使大脑皮质兴奋和抑制过程的平衡失调，所以需要保持愉快的心情。
关于异源性ACTH的基本介绍
异源性ACTH由肿瘤不适当地合成及分泌生物活性激素而引起相应临床症状及体征。最初命名为异位内分泌综合征。几乎所有非内分泌组织均可产生小量的不同肽类激素和激素前身物质，非内分泌肿瘤-激素内分泌综合征并非异位激素生成，是癌诱导的正常存在于癌来源组织的细胞特性的放大，更名为异源内分泌综合征。
异源性ACTH的原因分析介绍
异源性ACTH的病因 由肿瘤不适当地合成及分泌生物活性激素而引起相应临床症状及体征。男性多见(男∶女=3∶1)，好发于40～60岁，约半数可无Cushing征，但可有皮质醇增高，且每日8mg地塞米松不能抑制之。 本症之半数由肺癌所致，主要为燕麦细胞型，此型肺癌仅3%有Cushing征，此部分
关于异源性ACTH的检查介绍
异源性ACTH的检查诊断 癌肿(尤以肺癌)患者，除癌肿之症状(如消瘦、乏力、贫血)外，如有低血钾伴碱中毒(补钾不易纠正)、肌乏力、浮肿、精神症状、色素沉着、高血压或糖耐量异常，均应疑及异源ACTH综合征。ACTH增高也可见于20%～31%慢性阻塞性肺气肿病人和偶见于其他严重的非恶性肺部疾病。
揭示CCM3与GCKIII激酶MST4的异源二聚化机制
近日，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周兆才和张雷研究组的最新研究成果阐述了脑海绵状血管瘤因子3（CCM3）与 GCKIII激酶异源二聚化的分子机制。相关论文在线发表在了国际知名学术期刊《Cell》子刊《Structure》上。 脑海绵状血管瘤（CCM）是一种脑血管畸形疾病，与其相关的三个
异源双链分析的方法和应用
中文名称异源双链分析英文名称heteroduplex analysis;HA定 义一种测定基因突变的方法。即依据野生型和突变型DNA分子经加热变性和复性后产生异源双链，在非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，同源双链和异源双链的泳动性不同。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（
关于胚胎诱导的异源诱导者介绍
能诱导原肠胚外胚层形成一定的结构，并具有区域性诱导效应的组织称为异源诱导者（heterogeneous inductor）。它们虽不是组织者，却具有与组织者相当的形态发生效应，而且无种的特异性。它们包括许多成体和幼体的多种组织，广泛存在于动物界，甚至某些有机和无机化合物。最初发现成体组织对两栖类
异源双链分析的定义和应用
中文名称异源双链分析英文名称heteroduplex analysis;HA定 义一种测定基因突变的方法。即依据野生型和突变型DNA分子经加热变性和复性后产生异源双链，在非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，同源双链和异源双链的泳动性不同。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（
同源异源多倍体的概念
中文名称同源异源多倍体英文名称autoallopolyploid定 义同时具有同源和异源多个染色体组的细胞或个体。应用学科遗传学（一级学科），细胞遗传学（二级学科）
异源多倍体的研究相关介绍
经典的异源多倍体是由G.Karpechenko于1928年合成的。他想培育一种可育的杂种蔬菜，地上部分长有甘蓝（卷心菜Brassica）的叶子而地下部分长萝卜（Raphanus），甘蓝和萝卜这两个物种都是2n=18，而且亲缘关系比较近，可以进行杂交。从种子获得可以生存的杂种后代。但由于两亲本染色
节段异源多倍体的概念
中文名称节段异源多倍体英文名称segmental allopolyploid定 义不同染色体组之间同源程度较高的异源多倍体。应用学科遗传学（一级学科），细胞遗传学（二级学科）