Westernblot经验谈
哈哈,深蒙各位侠士对于兄弟的厚爱和信赖,恐怕我会令大家失望真正做western我也做的不多,不过由于效果都不是很差,所以就对于整个过程中的某些参数对于结果的影响没有深究,正所谓真正经历实验失败的人才会对具体细节理解深刻一样,但是从关于western方面的文献和资料来看,有关各个参数对于结果的影响是有高质量的paper阐述的,所以大侠们的这些问题和想法个人认为完全是可以做出一篇小论文评述的这两天刚好有些时间,就把曾经看的资料都大致再看了一下,自己总结了一下,可能仍然对上述大侠们的问题没有满意的解释,但可能会对大家的理解带来些许的帮助,也希望大家能提出意见和建议,在你们这些大侠面前献丑真是不好意思!首先有必要对整个蛋白电泳的背景有些了解:如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Lammli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法,这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多,而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题,而是对......阅读全文
液相色谱柱使用异常及解决方法
柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新色谱柱有的柱压可能相差4、5个MPa，特别是低端和色谱柱之间，这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条
如何判断一只色谱柱的“退休”时间？
如何判断一只色谱柱的“退休”时间？ 色谱工作者常会碰到这样的问题，色谱柱的塔板数能体现色谱柱的状态吗?如何确定一支色谱柱是否应该“退休”？新的色谱柱在使用前都要做什么？如何对柱子进行清洗？好的色谱柱应具备哪些性能？等等一系列问题，都是今天要和您探讨的！ 色谱柱开启和安装推荐步骤
【干货】如何判断一只色谱柱的“退休”时间？
色谱工作者常会碰到这样的问题，色谱柱的塔板数能体现色谱柱的状态吗？如何确定一支色谱柱是否应该“退休”？新的色谱柱在使用前都要做什么？如何对柱子进行清洗？好的色谱柱应具备哪些性能？等等一系列问题，都是今天小萃要和您探讨的。 新色谱柱开启和安装推荐步骤 1.使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，
双荧光素酶检测的原理和应用
一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏
张冰团队发现调控心肌线粒体合成和心力衰竭新机制
Circulation | 心力衰竭（Heart Failure）简称心衰是一类复杂的临床综合征，为大多数心血管疾病的终末阶段。具体是指心脏无法行使正常的泵血功能以维持血液灌流来满足人体需要。临床主要表现为呼吸困难，过度疲劳和运动耐量受限【1】。在全球约有2%的成年人患有心力衰竭，且随着年龄
基因克隆(gene－clone)的几种常用方法介绍2
其基本原理是：用一个在种源上相近的基因组将靶基因组中所有共同的基因掩盖起来,而只暴露出特异的基因,在整个反应中只有特异基因能被扩增。其操作程序为:(1)用同一限制性内切酶(一般用Bam HI,Bgl II或Hind III)同时处理靶基因组和掩盖基因组DNA，其中掩盖基因组DNA的量至少要2
OFweek生命健康科技创新中心在线招商会圆满闭幕！
新的时代，新的起点。2020年，在湾区崛起的转折点上，在抗疫胜利的考验路上，科技创新成为守护生命健康的坚强后盾。为创新加速，为生命护航，5月28日下午，“OFweek生命健康科技创新中心在线招商会”在线上准时开幕。随着大气磅礴的宣传片把观众的视野拉入靓丽的园区，在主持人的娓娓引导下，招商会在众人的期
双酶切反应
双酶切buffer的选择： 1、U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Its compatibility with the fou
MIELE洗瓶机维修保养与操作方法
德国 / MIELE 美诺洗瓶机是制药企业广泛应用的一种设备，洗瓶机主要是对西林瓶或者其它类似瓶在机械连续输送中进行内外清洗的专用设备。目前，国内市场上的有扭洗瓶机道式、箱式、滚筒式和立式等多种，无论是何种洗瓶机大多数采用了超声波清洗技术和田超声波空化作用产生的机械摩擦力，以清洗用一般洗瓶工难以清洗
玉米转录因子ZmMADS47和籽粒转录因子Opaque2互作可协同调...
玉米转录因子ZmMADS47和籽粒转录因子Opaque2互作可协同调控醇溶蛋白的表达玉米（Zea mays）原产于墨西哥和中美洲地区，是一种由古印第安人（Indians）在数千年前利用野生墨西哥类蜀黍（Euchlaenamexicana）（现存在于墨西哥和尼加拉瓜）杂交而来的品种。但是，作为一类
玉米转录因子和籽粒重要转录因子互作协同调控醇溶蛋白
玉米（Zea mays）原产于墨西哥和中美洲地区，是一种由古印第安人（Indians）在数千年前利用野生墨西哥类蜀黍（Euchlaenamexicana）（现存在于墨西哥和尼加拉瓜）杂交而来的品种。但是，作为一类重要的粮食作物，天然玉米籽粒在其营养价值上却有着重要的缺陷。根据已有的文献报道，玉米籽粒
玉米转录因子ZmMADS47和籽粒转录因子Opaque2－调控醇溶蛋白
玉米（Zea mays）原产于墨西哥和中美洲地区，是一种由古印第安人（Indians）在数千年前利用野生墨西哥类蜀黍（Euchlaenamexicana）（现存在于墨西哥和尼加拉瓜）杂交而来的品种。但是，作为一类重要的粮食作物，天然玉米籽粒在其营养价值上却有着重要的缺陷。根据已有
腺病毒系统使用指南（三）
腺相关病毒感染目的细胞预实验以2型AAV病毒为例，维真生物为您推荐的MOI值10000:1-100000:1，是根HEK293T细胞得出的数据，不同的细胞所使用的病毒MOI值会有所不同。建议您感染目的细胞前，进行预实验摸索最佳MOI值，推荐使用有荧光的对照病毒来摸索条件。1. 为了节省病毒，推荐使用
western－blot常见问题及解答
常见问题及解答： 1 、两快玻璃板之间灌胶 , 胶为什么总是不平 ? 1)你的玻璃洗干净没有？应该要洗得非常干净！ 2)过硫酸铵和TEMED的加量不合适，加量相对较多，凝胶凝固过快也会胶不平，最多按照分子克隆加倍 3)加完试剂以后没有很好的摇匀，导致有些部位的聚合剂浓度过高，聚合相对较快
重组系统腺相关病毒产品说明
一．Cre-loxP重组系统作用原理Cre重组酶和loxP位点Cre重组酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码，是由343个氨基酸组成的38kD的蛋白质。它不仅具有催化活性，而且与限制酶相似，能够特异性识别loxP位点。LoxP（l
真核转染
一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而
知识分享：维真－CreloxP－重组系统腺相关病毒产品说明
一．Cre-loxP重组系统作用原理 Cre重组酶和loxP位点 Cre重组酶（Cyclization Recombination Enzyme）由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码，是由343个氨基酸组成的38kD的蛋白质。它不仅具有催化活性，而且与限制酶相似，能够特异性识别loxP位点。
几种基因克隆的常用方法介绍（二）
3.2 Differential display PCR(DD-PCR) DD-PCR是在AP-PCR基础上发明的一种RT-PCR方法,主要用于 2种或多种类似生物个体在基因表达上的差异分析。其基本原理是:所有真核生物的成熟mRNA都含有不同长度的poly+(A)尾部序列,根据poly+ (
使用射线底片观片灯射线检测射线底片时需注意几个问题
射线检测因其检测灵敏度高，尤其是对于体积型缺陷(未焊透、夹渣、气孔等)是五种检测方法中灵敏度高，且其对缺陷的定性、定量、定位也是最准的，故其应用极为广泛。 所以射线底片观片灯对底片进行准确地评定(定性、定量、定级)是射线检测工作人员重要的工作，底片评定除需要掌握一定的材料、焊接方面的知
使用射线底片观片灯射线检测射线底片时需注意的
射线检测因其检测灵敏度高，尤其是对于体积型缺陷(未焊透、夹渣、气孔等)是五种检测方法中灵敏度高，且其对缺陷的定性、定量、定位也是最准的，故其应用极为广泛。 所以射线底片观片灯对底片进行准确地评定(定性、定量、定级)是射线检测工作人员重要的工作，底片评定除需要掌握一定的材料、焊接方面的知
使用射线底片观片灯射线检测射线底片时需注意
射线检测因其检测灵敏度高，尤其是对于体积型缺陷(未焊透、夹渣、气孔等)是五种检测方法中灵敏度高，且其对缺陷的定性、定量、定位也是最准的，故其应用极为广泛。 所以射线底片观片灯对底片进行准确地评定(定性、定量、定级)是射线检测工作人员重要的工作，底片评定除需要掌握一定的材料、焊接方面的知
重组蛋白表达的几种常用标签介绍
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用载体标签及其功能和优点。一. GST标签GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原
RNA干扰载体的构建的实验流程
RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控，RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域，进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体，本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。产品技术背景pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动
缓冲盐使用不当对色谱柱影响很大该注意什么？如何解决
柱压升高 原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高； 相同化合物的保留时间发生变化 原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化； 柱效下降 原因： i)有些缓冲
聚焦电子显微学，关注实验室管理
--2017年度北京市电子显微学研讨会暨2017年全国实验室科学管理交流会在无锡召开 分析测试百科网讯 2017年7月22日-23日，由北京理化分析测试技术学会、北京市电镜学会举办的“2017年度北京市电子显微学研讨会暨2017年全国实验室科学管理交流会”在江苏省无锡市和怡阳光酒店召开。为推动
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
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产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
质谱沙龙第十五期活动报道
2008年12月21日下午，质谱沙龙第十五期活动在第二炮兵总医院远程会诊中心会议室举行。来自发酵研究院、清华大学、二炮总医院、朝阳医院、北大医学院、北医三院、安贞医院、解放军307医院、中科院植物所、AB公司的各位专家、老师、学生20余人。 质谱在植物代谢组学中的应用
【分享】几种常用的蛋白标签的功能和优点
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用的蛋白标签及其功能和优点。 一. GST标签 GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。
野菊花超临界二氧化碳萃取物的抗炎活性及其机理研究
野菊花是传统的清热解毒药,具有清热解毒,疏风解热的功效,临床上常用于治疗上呼吸道感染、急性扁桃体炎及流感、腮腺炎等等,而这些功效在现代医学上均属于炎症反应范畴。现代药理学研究也表明,野菊花具有显著的抗炎作用。应用超临界二氧化碳萃取技术提取野菊花中的有效成分,保留了野菊花中的挥发油、萜类、酚酸及黄酮类