InGelDigestionofProteinsSeparatedbyPolyacrylamideGelElectrophoresis
1. Excision of protein bands (spots) from polyacrylamide gelsRinse the gloves you use with water to avoid traces of dust in your sample.Rinse the gel with water.Excise spots with clean pipette tip (f 2 mm) cutting as close to the edge of the spot as possible (to reduce the volume of ''background'' gel)Transfer gel spot into a well of a 96-microtitre plate (Costar # 3363 + 3092)2. Reduction and alkylat......阅读全文
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE,polyacrylamide－gel－...2
（3）电荷效应在分离胶中，各种血清蛋白所带静电荷不同，而有不同的迁移率。表面电荷多，则迁移快，反之则慢。因此各种蛋白质按照电荷多少、分子量大小及分子形状以一定顺序排成一个个区带。不连续PAGE所具有的分子筛效应、浓缩效应和电荷效应大大提高了它的分辨率。电泳后蛋白质染色目前常用的是考马斯亮蓝法，其比氨
RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE;－polyacrylamide－gel－electrophor...
一、原理核酸（ribonucleicacid，RNA）分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷，将其放入电场中，可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应，核酸分子大小、形状不同，故在电场作用下，核酸分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同，依此可达到分离纯化的目的。 二、材料、仪器设
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE,polyacrylamide－gel－...3
【目的和要求】1. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理2. 掌握垂直板状凝胶电泳槽的使用和凝胶的配制方法。3. 学会利用相对迁移率分析蛋白质种类。【实验原理】带电颗粒在电场的作用下，向着与其相反的电极移动，称为电泳。电泳做为一种物质分离及鉴定技术，其原理在于任一物质质点，由于其本身的解离作用或由于表面
RLGS－protocol
A. Preparation of DNA SolutionIn the case of rice, for example This method may be appllicable for many grass species and some other plants.
蛋白质检测
· Protein detection (Aberdeen's Lab)The method used to locate the proteins following 2D-PAGE depends on the nature of the original sample.
DNA测序
DNA测序（主要内容如下）· Sequencing Gel Preparation· Preparation of Templates · DNA Sequencing by the Dideoxy Method· DNA Sequen
A－Method－for－Assaying－Deubiquitinating－Enzymes1
AbstractA general method for the assay of deubiquitinating enzymes was described in detail using 125I-labeled ubiquitin-fused αNH-MHISPPEPESEEEEEHYC (
Native－chromatin－immunoprecipitation－protocol
实验概要Native chromatin immunoprecipitation to query specific chromatin states of individual genes. 主要试剂10 x TBS 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) 1.5 M NaCl 30 mM
非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义和应用特点
中文名称非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳英文名称nonreductive polyacrylamide gel electrophoresis定 义不含巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)等还原剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳。在这种电泳中蛋白质的二硫键不会被还原打开，与还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果对比，可以分析蛋白
非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳
中文名称非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳英文名称nonreductive polyacrylamide gel electrophoresis定 义不含巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)等还原剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳。在这种电泳中蛋白质的二硫键不会被还原打开，与还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果对比，可以分析蛋白
Partial－Endonuclease－Digestion
Partial Endonuclease DigestionPrepare a 100 µl reaction mixture containing the DNA of interest in the appropriate 1X restriction enzyme buffer. Divide
Preparation－of－Polyacrylamide－Gels
1. Prepare 20X TBE as:216 g Tris Base110 g Boric Acid80 mL 500 mM EDTA, pH 8.0700 mL ddH2OMix. Bring volume to 1 L. Autoclave.2. Prepare Acrylamide so
如何判定蛋白质的质谱鉴定结果的差异
1 单个蛋白鉴定1. 用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末，或经过SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）的单个条带或二维电泳的单个点。2. 蛋白酶解成多肽。3. 液相分离多肽，离子化的多肽进入质谱，母离子检
如何判定蛋白质的质谱鉴定结果的差异
1 单个蛋白鉴定1. 用于鉴定纯化的单个蛋白的溶液或粉末，或经过SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）的单个条带或二维电泳的单个点。2. 蛋白酶解成多肽。3. 液相分离多肽，离子化的多肽进入质谱，母离子检
顽拗性植物组织的蛋白质组学研究（苯酚法提取蛋白质）
1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低，并且存在多种非蛋白质成分，如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物，使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切，传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA
Phosphoproteins－pr...
实验概要The following procedure provides a method of detection of phosphorylated proteins.实验步骤1. To a sample of protein solution containing 1-100 ng of
PCR产物纯化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
PCR的下游应用
· Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products (Robert H. Cruickshank)· Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products (Immunology Resourc
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(twodimensional－polyacrylamide－gel－el
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污
基于PCR技术的染色质沉淀分析
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
PCR实验指导与常见问题分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
《生物化学》――名词解释
氨基酸（amino acids）: 是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在α-碳上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。 必需氨基酸（essential amino acids）： 指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从饮食中获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等
PCR的下游应用
・ Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products(Robert H. Cruickshank)・ Agarose Gel Electrophoresis of PCR Products(Immunology Resource)
Purification－of－MBP－(maLTosebinding－proteins)－Fused－Proteins
Express fusion proteins as per the GST-fused protocol up to Step 7 (Day 3). All steps in protein purification should be done at 4° C unless otherwise
哺乳动物RNAi技术－Mammalian－RNA－Interference
Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University, New York Excerpted from RNAi: A Guide To Gene S
Cyanogen－Bromide－digestion－of－protein
1. Proteins are TCA precipitated and washed with acetone, then dried.2. The CNBr should be brought to room temperature in the hood and used ONLY in th
Restriction－Enzyme－Digestion－of－DNA
Materials:10X restriction enzyme buffer (see manufacturer's recommendation)DNAsterile waterrestriction enzymephenol:chloroform (1:1)Add the follow
自然染色质免疫沉淀实验设计
1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approxima
Native－chromatin－immunoprecipitation－protocol
实验概要The method is a native chromatin immunoprecipitation protocol.主要试剂1. 10 x TBS 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) 1.5 M NaCl 30 mM CaCl2 20 mM MgCl2 50 mM Na
Interleukin6－Induced－Acute－Phenotypic－Microenvironment－Promote...（二）
As a primary component of circulatory system, serum is the major reservoir of thousands of proteins secreted or “leaked” from a broad spectrum of