血清蛋白琼脂糖凝胶电泳
【原理】 琼脂糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖,它由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电泳,因为固体支持物的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一种较好的电泳材料,分离效果较好。 血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也相差很大,因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。 琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类......阅读全文
筛分型琼脂糖凝胶电泳实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TAE琼脂糖仪器、耗材 电泳仪实验步骤 1. 在TAE电泳缓冲液中熔化3%~5%低熔点筛分型琼脂糖。将胶倒入普通琼脂糖凝胶装置中。2. 与普通琼脂糖凝胶一样加样和电泳。(对2%的凝胶溴酚蓝迁移到大约50 bp)3. 分离低熔点琼脂糖中片段。(对于<1 000 bp
琼脂糖凝胶电泳技术介绍
一、凝胶制备1.微波炉溶解琼脂糖时,胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾,1)总液体量不宜超过三角锥瓶的 50% 容量,2)2% 以上胶液设置中火加热3)胶液剧烈沸腾时,停止加热,移开三角锥瓶,请戴上防热手套,小心摇动三角锥瓶,然后再次加热,胶液沸腾直至胶液清澈,保证琼脂糖完全溶解
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验可用于:(1)检测提取的RNA样品的完整性;(2)测定RNA分子量。实验方法原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系
琼脂糖凝胶电泳marker的作用
琼脂糖凝胶电泳marker的作用是分子标记。DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性
琼脂糖凝胶电泳使用什么染色
用琼脂糖作支持介质。另外,实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。要注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。其好处是染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特
琼脂糖凝胶电泳检测dna原理
琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离、纯化、鉴定DNA片段的典型方法,其特点为简便、快速。DNA片段琼脂糖凝胶电泳的原理与蛋白质的电泳原理基本相同,DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过介质而泳动,除电荷效应外,凝胶介质还有分子筛效应
琼脂糖凝胶电泳的操作流程
准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普
琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物
1. 用0.5X或1XTBE制备2%(W/V)琼脂糖凝胶,加入适量的溴化乙锭。 2. 琼脂糖凝胶的长度与宽度应该与PCR扩增管数量相适应,每一扩增管应有相应的一个电泳泳道,凝胶厚度为3~5 mm,一般用三只梳子形成三排加样孔。 3. 将PCR扩增管从PCR扩增仪中取出,用加样器吸取扩增后的
琼脂糖凝胶电泳结果怎么分析
不一定要取要取5µl,10µl,15µlDNA,你提取的应该是基因组DNA,主要看条带的位置判断你提取的DNA是否完整,从图上看出,与Marker比较,你提取的基因组DNA分子量在23k以上,还算完整,不过有RNA残留,所前端有拖带,还有你的电泳条件没有控制好,条带不齐整
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
实验方法原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%~1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要
筛分型琼脂糖凝胶电泳实验
电泳实验 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验
实验方法原理 在pH值为8.0~8.3时,核酸分子碱基几乎不解离,磷酸全部解离,核酸分子带负电,在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物,在分子筛的作用下,使分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异,从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分子中嵌入荧光染料(如EB)后,在
琼脂糖凝胶电泳的优缺点
琼脂糖凝胶电泳的优点 对于大多数应用,仅需要单组分琼脂糖,不需要聚合催化剂。因此,琼脂糖凝胶制备简单,快速。 凝胶易于倒入,不会使样品变性。 样品也可以回收。 琼脂糖凝胶电泳的缺点 凝胶在电泳过程中会融化。 缓冲区可能耗尽。 不同形式的遗传物质可能以不可预测的形式运行。
5.2.1-甲醛变性琼脂糖凝胶电泳
试剂、试剂盒10XMOPS 电泳缓冲液甲醛甲酰胺10X 加样缓冲液溴化乙锭琼脂糖DEPC 处理的水仪器、耗材水平电泳装置水浴实验步骤(一)材料与设备1) 水平电泳装置2) 水浴3)10XMOPS 电泳缓冲液:0.2mol/LMOPS(PH7.0),20 mmol/L 乙酸钠,10 mmol/LEDT
琼脂糖凝胶电泳的原理什么
琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分
DNA的琼脂糖凝胶电泳简介
琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型,同时与凝胶的浓度也有密切关系。1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系(1)DNA分子的大小 在凝胶中,DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段
琼脂糖凝胶电泳的原理什么
琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验
实验方法原理 RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普
琼脂糖凝胶电泳的技术介绍
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶电泳的基本介绍
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb的DNA。这是因为在琼脂糖凝胶中,DNA分子的有效直径超过凝胶孔径时,在电场作用下,迫使DNA变形挤过筛孔,而沿着泳动方向伸直,因而分子大小对迁移率影响不大。如此时改变电场方向,则DNA分子必须改变其构象,沿新的泳动方面伸直,而转向时间与DNA分子大小关系极
琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物
一.原理 DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术,例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针,回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率:前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应;后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。 本实验采
琼脂糖凝胶电泳marker的作用
琼脂糖凝胶电泳marker的作用是分子标记。DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性
琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物
1. 用0.5X或1XTBE制备2%(W/V)琼脂糖凝胶,加入适量的溴化乙锭。2. 琼脂糖凝胶的长度与宽度应该与PCR扩增管数量相适应,每一扩增管应有相应的一个电泳泳道,凝胶厚度为3~5 mm,一般用三只梳子形成三排加样孔。3. 将PCR扩增管从PCR扩增仪中取出,用加样器吸取扩增后的反应液,加入相
琼脂糖凝胶电泳及其影响因素
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DN
琼脂糖凝胶电泳使用什么染色
用琼脂糖作支持介质。另外,实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。要注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。其好处是染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特
琼脂糖凝胶电泳marker的作用
琼脂糖凝胶电泳marker的作用是分子标记。DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性
琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物
1. 用0.5X或1XTBE制备2%(W/V)琼脂糖凝胶,加入适量的溴化乙锭。2. 琼脂糖凝胶的长度与宽度应该与PCR扩增管数量相适应,每一扩增管应有相应的一个电泳泳道,凝胶厚度为3~5 mm,一般用三只梳子形成三排加样孔。3. 将PCR扩增管从PCR扩增仪中取出,用加样器吸取扩增后的反应液,加入相
琼脂糖凝胶电泳的操作流程
准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普
琼脂糖凝胶电泳的技术原理
琼脂糖凝胶电泳的分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于
琼脂糖凝胶电泳的原理简介
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小